新疆盐生植物耐盐相关基因的克隆、序列分析与功能初步检测

摘要

本研究通过RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)的方法，它是基于同源序列克隆候选基因家族成员的快捷途径，鉴定和克隆新疆野生耐盐碱植物盐角草、盐爪爪、盐穗木NHX1基因、花花柴、盐爪爪、盐桦钙调蛋白(CaM)基因，并进行序列分析，对钙调蛋白进行功能性缺失、功能性恢复等研究，可以确定其下游受体蛋白，并进一步揭示钙调蛋白在植物耐盐过程中的作用机制和其参与植物耐盐生理的调控方式，利用盐生植物改善盐碱环境都是有意义的。

目录

论文说明：英文缩略语

第一部分文献综述第一章植物耐盐基因的研究进展

1.离子运输相关基因

2.与有机溶质合成相关的基因

3.过氧化物酶相关基因与盐碱胁迫应答

4.LEA蛋白类型基因与盐胁迫

5.光合作用相关的抗盐碱基因

6.具有一定调节作用的抗盐碱相关调控基因

第一部分文献综述第二章植物耐盐基因NHX1的研究进展

1.Na+/H+反向运输载体基因及其家族

2.NHX1蛋白的作用机理

3.NHX1基因工程进展

4.展望

第二部分实验部分 第一章盐生植物NHX1基因的克隆与序列分析

1.材料和试剂

2.方法

2.1总RNA的提取

2.2基因克隆

2.3 pMD18-T-NHX1测序载体的构建

2.4重组质粒的转化

2.5酶切鉴定阳性克隆

2.6质粒的大量提取与纯化

2.7测序

3.实验结果

3.1 NHX1基因全长序列的获得

3.2盐角草、盐爪爪和盐穗木NHX1 cDNA序列分析

3.3序列相似性分析

4.讨论

第二部分实验部分 第二章 盐角草NHX1基因植物表达载体的构建与植物转基因

1.材料和试剂

2.方法

2.1农杆菌感受态细胞制备

2.2 pBI121-NHX1植物表达载体的构建

2.3转化农杆菌感受态细胞

2.4植物基因转化

3.实验结果

3.1植物表达载体的构建

3.2植物表达载体的鉴定

4.讨论

第二部分实验部分 第三章 新疆盐生植物钙调蛋白基因的克隆与序列分析

1.材料和试剂

2.方法

2.1总RNA提取

2.2 RT-PCR反应

2.3 CaM基因cDNA的克隆

2.4重组质粒的鉴定

2.5花花柴、盐爪爪和盐桦CaM cDNA的序列测定及序列分析

3.实验结果

3.1 RT-PCR产物鉴定

3.2测序载体的构建及其鉴定

3.3花花柴、盐爪爪和盐桦钙调蛋白cDNA序列测定

3.4钙调蛋白基因序列的同源性分析

4.讨论

结 论

参考文献

致 谢

个人简历

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