通过共免疫鼠卵透明带3DNA和蛋白疫苗技术增强免疫不孕效果及降低卵巢炎症反应的研究

摘要

本文探讨了一种新的免疫避孕策略即：共免疫鼠卵透明带3(mZP3)DNA和蛋白疫苗在保留高水平抗体的同时，不仅能够消除T细胞炎症反应，而且造成小鼠生育率的显著下降。共免疫不育疫苗的抗生育率达到了70％(从naive小鼠的100％下降到了30％)，其它各组抗生育率在40％-60％之间。抗体分析显示，共免疫组的抗体水平达到了最高。在共免疫组，不孕小鼠和生育小鼠抗体水平的差异是显著的，高水平的抗体反应和生育率的下降是呈正相关的；然而，其它各组生育率下降和抗体水平之间没有相关性。 组织学分析显示，在共免疫组的不孕小鼠卵巢中呈现出正常的卵泡发育，而其它各免疫组的大部分不孕小鼠卵巢缺少成熟的卵泡，这可能是造成这些小鼠不孕的原因。在共免疫小鼠中，正常卵泡发育和T细胞反应的抑制之间具有明显的相关性；同时，共免疫可减少炎症细胞因子IFN-Y的表达，增加lL-1 Q和FoxP3的表达，揭示这种抗炎症反应可能是调节性T细胞介导的。 由于调节性T细胞能够抑制免疫反应和维持对自身抗原的免疫耐受，DNA疫苗和蛋白疫苗共免疫诱导的调节性T细胞能够调控病理性T细胞反应，使得共免疫小鼠避免了异常的卵泡发育，我们以卵巢自主免疫疾病(autoimmuneovarian disease： AOD)作为研究模型来探讨这类调节性T细胞的特征及作用机理。ZP3蛋白抗原引起的自主免疫反应是AOD的重要诱因原因之一。用mZP3蛋白和完全弗氏佐剂诱导的AOD小鼠模型，我们探讨了采用共免疫的方法来治疗AOD的可行性。研究结果显示，共免疫mZP3 DNA和蛋白疫苗显著减轻了AOD的发病程度，并且抑制了抗原特异性的T细胞反应，降低了炎症因子IL-12和INF-Y的表达水平，这些作用可能是由于共免疫诱导出了一群特异性的调节性T细胞来完成的。这群调节性T细胞高表达lL-10和FoxP3。在第一次共免疫的同时，将抗CD25的抗体同时注射到小鼠体内，抗VP1的抗体作为无关抗体对照。结果显示，抗CD25的抗体没有影响共免疫的治疗效果；同时，与其它各组相比，共免疫小鼠脾脏和淋巴结的CD4<'+>T细胞CD25的表达没有发生变化，这群调节性T细胞可能不属于CD25<'+>。将CD4<'+>CD25<'->和CD4<'+>CD25<'+>细胞从共免疫和错配免疫的小鼠中分离纯化出来，通过尾静脉过继转移到发病小鼠体内，发现只有从共免疫来源的CD4<'+>CD25<'->细胞才能治疗AOD。将纯化的上述细胞进行细胞因子表达检测，结果显示，只有CD4<'+>CD25<'->。细胞的IL-10和FoxP3的表达显著增加。这些结果说明，共免疫诱导了调节性T细胞，并且这群调节性T细胞的特征是CD4<'+>/CD25<'->/FoxP3<'+>，并能表达lL-10。尝试了采用共免疫DNA和蛋白疫苗的方法来治疗自主免疫疾病。总之，本研究证明了mZP3 DNA疫苗和蛋白疫苗共免疫显著降低了小鼠的生育率。这种方法不仅诱导了最高水平的抗体反应，也抑制T细胞反应，避免了病理性T细胞反应对卵巢造成的伤害。病理性T细胞反应的抑制与共免疫诱导的CD4<'+>CD25<'->调节性T细胞是密切相关的，这类调节性T细胞表达lL-10。 这些研究结果揭示了共免疫mZP3 DNA和蛋白疫苗能够显著提高抗生育效果，并且不影响卵泡的正常发育。这不仅克服了T细胞反应造成的卵巢炎，也克服了只含有B细胞表位的多肽疫苗免疫原性的不足，为开发人用避孕疫苗提供了理论基础。

目录

声明

第一部分文献综述

第二部分研究正文

第一章共免疫鼠卵透明带3 DNA和蛋白疫苗增强免疫不孕效果并减少卵巢炎的发生

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

第二章采用共免疫的方法治疗卵巢炎

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

第三部分结论与展望

附录

参考文献

致谢

个人简介

博士及硕士期间已发表和待发表的论文