尿液miR-106B-25基因簇在膀胱癌中的诊断应用价值

摘要

目的：
　　本研究旨在通过检测miR-106b-25基因簇在膀胱癌患者离心尿液上清中的表达，评估其作为膀胱癌无创诊断分子标志物的价值。
　　方法：
　　本研究分为三个步骤:(1)收集20例膀胱癌患者和20例对照组尿液，荧光定量RT-PCR检测miR-106b-25簇中三种miRNAs的表达，筛选出差异目的miRNA。(2)荧光定量RT-PCR验证miR-106b-25簇中筛选出的差异miRNA在112例膀胱癌患者和78例对照组尿液中表达，绘制受试者工作特征(ROC)曲线，分析差异目的miRNA对膀胱癌的早期诊断价值。(3)荧光定量RT-PCR检测差异目的miRNA在20例配对的膀胱癌患者术前和术后14日尿液中的表达，评估差异目的miRNA在膀胱癌疗效监测中的应用价值。
　　结果：
　　(1)膀胱癌患者尿液miR-106b表达显著高于健康对照组(P＜0.001)，而miR-93和miR-25表达则无显著差异（miR-93，P=0.645; miR-25，P=0.281），确定miR-106b为表达差异的目的miRNA。
　　(2)验证试验表明miR-106b在膀胱癌尿液中表达显著高于健康对照组(P＜0.001)。鉴于miR-106b在膀胱癌尿液中的高表达水平，我们进一步评估了尿液miR-106b的表达与膀胱癌患者临床病理参数间的关系。尿液中miR-106b表达水平与膀胱癌浸润程度显著相关，浸润性膀胱癌患者尿液中miR-106b表达水平显著高于非浸润性膀胱癌患者(P=0.006)。尿液中miR-106b表达水平与膀胱癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及局部淋巴结转移则没有显著关系。尿液中miR-106b表达水平诊断膀胱癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.802(95％ CI:0.753-0.872)。当以0.975为诊断最佳临界值，尿液中miR-106b对膀胱癌的诊断敏感度和特异度分别为76.8％和72.4％，
　　(3)膀胱癌术后尿液miR-106b表达水平较术前显著降低（P=0.007）。一例膀胱癌复发患者尿液miR-106b表达水平则复而上升。
　　结论：
　　(1)MiR-106b-25基因簇成员miR-106b水平在膀胱癌患者尿液中高表达，且术后表达下降，可能是潜在的膀胱癌早期诊断与疗效监测的分子标志物。
　　(2)尿液miR-106b水平与膀胱癌患者浸润程度显著相关，提示miR-106b可能参与了膀胱癌的肿瘤浸润病理过程，在膀胱癌的发生与发展进程中具有重要作用。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

一、临床受试者资料

二、试验设计

三、标本采集与处理

四、主要试剂与仪器

五、数据处理与统计学分析

结果

1．U6作为内参基因的可行性

2．筛选差异表达的尿液miRNAs

3．验证miR-106b在膀胱癌尿液与对照组尿液中的表达

4．膀胱癌尿液miR-106b表达水平与患者临床病理参数间的关系

5．评估尿液miR-106b对膀胱癌的诊断效能

6．评估尿液miR-106b表达水平对膀胱癌的疗效监测效能

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文