类风湿性关节炎病人骨髓中T细胞的异常表达及其在发病中作用机制的研究

摘要

本文分为两个部分进行探讨：
　　第Ⅰ部分 类风湿性关节炎病人软骨下骨髓中Th17细胞和Th1细胞表达水平明显升高，而调节性T细胞则明显降低
　　目的:
　　在类风湿性关节炎病人中，未曾有Th17,Treg和Th1细胞在骨髓中研究报道。本次研究的目的是为了检测Th17,Treg和Th1细胞在类风湿性关节炎病人软骨下骨髓中的表达情况并加以分析。从而阐明类风湿性关节炎病人骨髓中的一些免疫异常表现。通过对骨髓中致病性T细胞的检测分析，更加深入地了解类风湿性关节炎病人骨破坏时发生的骨免疫紊乱，从而对骨-免疫有了更深入的认识，让人们对软骨下骨髓区域局部的免疫异常更加重视。并为RA发病机制研究提供新的方向，为患者的诊治起到参考作用。
　　材料和方法:
　　(1)研究对象包括26例DAS28指数≥2.6的RA病人，11例OA患者和10例健康对照，保留其静脉血及骨髓血，进行流式细胞检测分析。
　　(2)标本行PMA、Monensin、Ionomycin4小时刺激后流式细胞测定，检测外周血、骨髓血中Th以及细胞内IL-17,IFN-γ和TNF-α的表达，从而得到外周血及骨髓血中Th17,Th1以及表达TNF-α的Th细胞的情况。
　　(3)收集病人及对照组的外周血及骨髓血，提取其单个核细胞，用Treg检测盒子进行处理，行CD4,CD25及Foxp3染色，检测其Treg水平。
　　结果:
　　(1)外周血中，Th17细胞的表达在RA病人中显著高于骨性关节炎病人组(P＜0.05)以及健康对照组(P＜0.05)。骨髓中的Th17细胞表达更高，在骨髓血中，Th17细胞的表达在RA病人中也是明显升高的，显著高于骨性关节炎病人组(P＜0.05)以及健康对照组(P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Th17细胞的比例较其外周血中是显著升高的。这说明RA病人骨髓中免疫异常更加严重。
　　(2)然而，外周血中，Th1细胞的表达在RA病人中，与骨性关节炎病人组(P＜0.05)以及健康对照组(P＜0.05)无明显统计学差异。但是RA病人骨髓中的Th1细胞表达明显升高，在骨髓血中，Th1细胞的表达在RA病人中是明显升高的，显著高于骨性关节炎病人组(P＜0.05)以及健康对照组(P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Th1细胞的比例较其外周血中是显著升高的。外周血中，表达TNFα的Th细胞水平在RA病人中明显升高，显著高于骨性关节炎病人组以及健康对照组。骨髓中表达TNFα的Th细胞水平更高，在骨髓血中，其表达在RA病人中是明显升高的。而且在RA病人，其表达水平在骨髓血中的较其外周血中是显著升高的。
　　(3)外周血中，RA患者的Treg亚群的表达，与OA患者Treg亚群的表达无明显差异(P＞0.05)，与对照相比较也是如此。然而，骨髓中的Treg细胞表达更低，在骨髓血中，Treg细胞的表达在RA病人中也是明显降低的，显著低于骨性关节炎病人组(P＜0.05)以及健康对照组(P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Treg细胞的比例较其外周血中是显著降低的(P＜0.05)。这说明RA病人骨髓中免疫异常更加严重。
　　结论:
　　(1)RA患者中，其骨髓血中Th17亚群，Th1亚群以及表达TNF-α的Th亚群，三个亚群水平均明显高于对照组及OA病人组，并且RA病人骨髓血中的Th17细胞，Th1细胞以及表达TNFα的Th细胞水平较其外周血中明显升高;
　　(2)RA患者中，其骨髓血中Treg细胞水平较健康对照组及骨性关节炎组是异常降低的，并且RA病人骨髓血中的Treg细胞较其外周血中明显降低;
　　(3)骨髓中Th细胞各细胞群与Treg细胞之间均呈负相关性，说明两种不同的细胞群之间存在着反向平衡。
　　第Ⅱ部分 Th22,Th17和Th1亚群及IL-22和IL-17在RA病人软骨下骨髓中表达明显升高
　　目的:
　　在类风湿性关节炎病人中，有许多关于外周血和关节液中Th22,Th17和Th1细胞以及其相关细胞因子的研究报道。但是未曾有Th22,Th17和Th1细胞及其主要效应性细胞因子在骨髓中研究报道。本次研究的目的是为了检测Th22,Th17和Th1细胞及其主要效应性细胞因子在类风湿性关节炎病人软骨下骨髓中的表达情况并加以分析。从而阐明类风湿性关节炎病人骨髓中的一些免疫异常表现。
　　通过对骨髓中辅助性T细胞及其细胞因子的检测分析，更加深入地了解类风湿性关节炎病人骨破坏时发生的骨免疫紊乱，从而对骨-免疫有了更深入的认识，让人们对软骨下骨髓区域局部的免疫异常更加重视。并为今后该病的诊断和治疗起到一定的参考指导作用。
　　材料和方法:
　　(1)选择40例DAS28指数≥2.6的RA病人，9例OA病人和9例对照，保留外周血及骨髓血，荧光染色后流式细胞检测，并保留血浆检测细胞因子。
　　(2)全血加PMA、Monensin、Ionomycin，刺激4小时，荧光染色后流式细胞检测淋巴细胞表面CD4的表达以及细胞内IL-22,IL-17和IFN-γ的表达，从而检测Th22,Th17以及Th1亚群。
　　(3)收集两组患者及对照的外周血及骨髓血血浆，进行IL-22,IL-17和IFN-γ的ELISA，检测这些因子的表达。
　　结果:
　　(1)外周血中，Th22细胞亚群的表达的均值在RA病人、OA病人、健康对照分别是1.57±0.73％、0.85±0.22％、0.82±0.14％，分析显示RA病人中Th22亚群远远高于OA病人及健康对照(P＜0.05)。骨髓血检测中，RA患者、OA患者、对照的Th22亚群的均值分别是2.54±1.16％、0.85±0.19％、0.82±0.14％，经统计分析可知，RA病人Th22细胞亚群的表达显著高于OA病人及健康对照(P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Th22细胞的比例较其外周血中是显著升高的。这说明RA病人骨髓中免疫异常更加严重。
　　(2)外周血中，Th17细胞的表达在RA病人中明显升高(2.02±0.75％)，显著高于骨性关节炎病人组(1.01±0.26％，P＜0.05)以及健康对照组(1.44±0.16％，P＜0.05)。骨髓中的Th17细胞表达更高，在骨髓血中，Th17细胞的表达在RA病人中是明显升高的(2.83±1.00％)，显著高于骨性关节炎病人组(1.00±0.22％，P＜0.05)以及健康对照组(1.02±0.14％，P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Th17细胞的比例较其外周血中是显著升高的。然而，外周血中，Th1细胞的表达在RA病人中(19.9±7.71％)，与骨性关节炎病人组(19.9±1.6％，P＜0.05)以及健康对照组(20.6±1.50％，P＜0.05)无明显统计学差异。但是RA病人骨髓中的Th1细胞表达明显升高，在骨髓血中，Th1细胞的表达在RA病人中是明显升高的(31.7±11.5％)，显著高于骨性关节炎病人组(24.2±3.37％，P＜0.05)以及健康对照组(23.7±3.71％，P＜0.05)。更加有意义的是，在RA病人，其骨髓血中Th1细胞的比例较其外周血中是显著升高的。
　　(3)RA病人外周血血浆中IL-22浓度水平明显升高(37.5±7.6 pg/ml，P＜0.05)，显著高于骨性关节炎病人组(22.4±1.66pg/ml，P＜0.05)以及健康对照组(22.4±1.45 pg/ml，P＜0.05)。RA病人外周血血浆中IL-17的水平在RA病人组(7.59±3.38 pg/ml，P＜0.05)也是显著高于骨性关节炎病人组(4.66±0.95pg/ml，P＜0.05)以及健康对照组(4.55±0.62 pg/ml，P＜0.05)的。在RA病人骨髓血浆中(39.89±14.2 pg/ml，P＜0.05)，IL-22的水平较OA病人(23.4±1.96pg/ml，P＜0.05)及健康组(14.55±2.89 pg/ml，P＜0.05)也是显著升高的。同样的，RA病人(12.3±5.66 pg/ml，P＜0.05)骨髓中IL-17的水平较OA病人(5.08±0.76 pg/ml，P＞0.05)及健康组(5.06±0.94 pg/ml，P＞0.05)也是显著升高的。但是，RA病人外周血及骨髓血中的IFN-γ水平和OA病人以及健康人无明显统计学差异，并且RA病人骨髓血和外周血血浆中该因子水平也无明显差异。
　　结论:
　　(1)相对于OA组及对照，RA患者骨髓血中Th22亚群，Th17亚群以及Th1亚群水平是显著增高的，而且与RA患者外周血相比，也是显著升高;
　　(2)RA病人外周血及骨髓血浆中的IL-22及IL-17水平较OA组及对照是显著升高的，并且IL-22及IL-17在骨髓中表达较外周血中也是显著升高;
　　(3)骨髓中Th22细胞，Th17细胞以及Th1细胞各细胞群之间均呈正相关性，各细胞均是一致性增高的。并且类风湿性关节炎病人骨髓中Th22细胞，Th17细胞与其相应的细胞因子IL-22及IL-17呈一致性升高。
　　(4)在RA病人中，随着RA病人疾病活动性的增加其骨髓中Th22细胞，Th17细胞与其相应的细胞因子IL-22及IL-17均升高，这说明RA患者骨髓血中这两种亚群表达及其因子水平与该疾病的病情轻重有正相关。

目录

声明

第Ⅰ部分 类风湿性关节炎病人软骨下骨髓中Th17细胞和Th1细胞表达水平明显升高，而调节性T细胞则明显降低

摘要

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

意义

附图表

参考文献

第Ⅱ部分 Th22，Th17和Th1亚群及IL-22和IL-17在RA病人软骨下骨髓中表达明显升高

摘要

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

意义

附图表

参考文献

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