黑色素瘤缺乏因子2在慢性乙型肝炎及其相关性肾小球肾炎中作用机制的初步研究

摘要

目的：
　　HBV感染是个全球性问题，由于HBV感染所导致的肝硬化，肝衰竭甚至肝癌等临床结局严重的威胁人类的健康。同时，HBV的感染也可导致许多肝外疾病的发生，HBV相关性肾小球肾炎即是常见的一种肝外HBV感染相关疾病。目前，关于两种疾病的发病机制均不明确，大多数观点认为与免疫反应相关。黑色素缺乏因子2(AIM2)属于HIN-200蛋白家族，其主要存在于细胞浆中，AIM2可被胞浆内dsDNA所识别并激活，并结合中间蛋白ASC形成炎性复合体，进一步激活caspase-1途径，诱导IL-1β、IL-18等炎性因子的成熟和释放，最终导致炎症的发生，在机体的固有免疫反应诱发的炎症中扮演重要作用。在慢性乙型肝炎中，乙肝病毒在复制的过程，首先位于肝细胞核内的CCC-DNA为乙肝病毒复制的终模板，由其为模板合成负链DNA，再由负链DNA为模板合成正链DNA，然后形成ds-DNA，在由胞内向胞外转移的过程中，利用胞内蛋白完成病毒的装配而释放。那么，在转运的过程中ds-DNA便有机会被胞浆内的AIM2所识别，形成炎性复合体从而诱发肝脏炎症;同样，在HBV-GN中，既往已有研究报道电镜检测可以发现肾组织固有细胞内存在有乙肝病毒样颗粒及HBV-DNA的复制，那么肾脏固有细胞胞浆中的AIM2也有机会识别HBV-DNA并被激活，通过caspase-1途径，释放IL-1β、IL-18炎性因子，从而导致肾脏炎症的发生。为了验证这一设想，进行了此项研究，通过检测肝脏及肾脏内AIM2的表达及与caspase-1，IL-1β及IL-18表达的关系，探讨HBV与AIM2的激活在CHB、HBV-GN中可能的致病机制，为这一疾病的发病机制和治疗提供新的思路和研究方法。
　　方法：
　　研究通过组织免疫组化实验测定慢性乙型肝炎组织及HBV-GN的肾组织中AIM2水平，及其与caspase-1，IL-1β、IL-18等炎性因子表达水平以及肝细胞，肾脏炎症程度的关系。
　　共计70例慢性肝炎的患者及79例慢性肾小球肾炎的患者纳入到本项研究，其中在慢性肝炎患者中，慢性乙型肝炎47例为实验组，慢性丙肝患者23例为对照组;慢性肾小球肾炎的患者中，慢性乙肝相关性肾炎(HBV-GN)病人54例作为实验组，慢性肾小球肾炎(CGN)患者25例作为对照组。以上所有的病人均根据研究的要求行肝脏穿刺或肾脏穿刺取得肝或肾组织标本制备石蜡包埋切片。应用免疫组化法半定量测定患者肝、肾穿标本中AIM2、Caspase-1、IL-18、IL-1β的表达，同时分析AIM2的表达水平与临床资料的相关性。本研究结果运用SPSS17.0软件包进行数据的统计学处理，两组间AIM2的表达及临床资料的的关系采用x2检验和Fisher精确概率检验，多个样本间的单因素比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Spearman's检验。所有结果的分析均以P＜0.05为有统计学意义。
　　结果：
　　1、在慢性乙型肝炎组织中，AIM2的表达主要定位于肝细胞胞浆内;
　　2、AIM2在慢乙肝组织内的表达明显高于其在慢丙肝患者肝组织中的表达(89.4％vs.8.7％，p＜0.00)，两者具有统计学意义;
　　3、慢乙肝患者肝组织内AIM2的表达与年龄(p=0.178)、性别(p=0.148)、e抗原的状态（p=0.825）无关;
　　4、AIM2的表达与ALT的水平具有统计学意义(p=0.03)，而与AST的水平无关(p=0.378);
　　5、在HBV高载量组(HBV-DNA≥1×105copies/ml)，AIM2的表达高于其在HBV低载量组(HBV-DNA＜1×105copies/ml)的表达(p＜0.01)，两者具有统计学差异;
　　6、AIM2的表达与肝脏炎症分级存在高度的相关性（p=0.007），而和纤维化分级则无明显相关（p=0.101）;
　　7、慢乙肝肝组织内AIM2的表达与caspase-1(rs=0.738，p＜0.01)，IL-1β(rs=0.527，p＜0.01)及IL-18(rs=0.642，p＜0.01)的表达呈正相关;
　　8、AIM2在HBV-GN肾组织中主要定位于肾小球系膜细胞及内皮细胞内;
　　9、在HBV-GN中，AIM2的阳性表达率为81.4％，明显高于其在CGN中的表达(4.0％)，两者具有统计学差异(81.4％vs.4.0％，p＜0.01);
　　10、AIM2的表达与血清e抗原的状态无关(p=0.614);同时与肾组织中HBV相关抗原的沉积无关(p=0.511);
　　11、HBV-GN中高病毒载量组中AIM2的表达相比较于低病毒载量组有统计学差异(p＜0.05);
　　12、不同病理类型的HBV-GN中AIM2的表达无统计学差异(p=0.940);
　　13、HBV-GN肾组织中AIM2的表达分别与caspase-1的表达(rs=0.444，p＜0.01)以及IL-1β的表达(rs=0.379，p＜0.01)呈正相关;而caspase-1的表达亦与IL-1β的表达呈正相关(rs=0.515，p＜0.01)。
　　结论：
　　AIM2可能通过识别并结合HBV-DNA激活后活化Caspase-1形成炎性复合体，释放致前炎性因子IL-1β，IL-18造成CHB肝脏损伤及HBV-GN的肾损伤。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一部分 CHB肝组织内AIM2表达上调

1、材料与方法

2、结果

第二部分 HBV-GN肾组织内AIM2表达上调

1、材料与方法

2、结果

讨论

结论

本研究的创新点及局限性

附图

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录

Expression of AIM2 is Correlated with IncreasedInflammation in Chronic Hepatitis BPatients

Expression of AIM2 is high and correlated with inflammation in Hepatitis B virus associated glomerulonephritis