声明
摘要
符号说明
1．1本章引论
1．2糖胺聚糖(GAGs)的结构功能及检测
1．2．1 GAGs的结构和分类
1．2．2 GAGs的生物学功能
1．2．3 GAGs的分析检测
1．3蛋白聚糖(PGs)的结构功能及检测
1．3．1 PGs的分类及功能
1．3．2肝细胞癌(HCC)与Glypican-3(GPC3)
1．3．3 GPC3的分析检测
1．4高正电荷绿色荧光蛋白(ScGFP)
1．4．1 ScGFP的特性
1．4．2 ScGFP的应用
1．5选题意义
第二章GAGs均相检测方法的建立及条件优化
2．1实验材料
2．1．1材料与试剂
2．1．2实验仪器
2．2实验方法
2．2．1初始绿色荧光蛋白(StGFP)和ScGFP蛋白的构建表达和纯化
2．2．2氧化石墨烯(GO)对ScGFP的荧光淬灭作用
2．2．3试剂添加顺序的优化
2．2．4最适缓冲液的选择
2．2．5最适盐浓度的选择
2．2．6均相体系检测时间的选择
2．3实验结果与分析
2．3．1 StGFP和ScGFP蛋白的构建表达和纯化
2．3．2 GO对ScGFP的荧光淬灭作用
2．3．3试剂添加顺序的优化
2．3．4最适缓冲液的选择
2．3．5最适盐浓度的选择
2．3．6均相体系检测时间的选择
2．4本章小结
第三章GAGs均相检测方法的应用
3．1实验材料
3．1．1材料与试剂
3．1．2实验仪器
3．2实验方法
3．2．1 ScGFP与不同种类GAGs结合常数的测定
3．2．2缓冲溶液中不同种类GAGs的检测
3．2．3血清中Hep的检测
3．2．4 Hep中其它GAGs的检测
3．2．5 Hep中过硫酸化硫酸软骨素(OSCS)污染物的检测
3．3实验结果
3．3．1 ScGFP与不同种类GAGs结合常数的测定
3．3．2缓冲溶液中不同种类GAGs的检测
3．3．3血清中Hep的检测
3．3．4 Hep中其它GAGs的检测
3．3．5 Hep中OSCS污染物的检测
3．4本章小结
第四章ScGFP对活细胞及器官中GAGs的可视化检测
4．1材料与仪器
4．2．2活细胞表面ScGFP结合时间分析
4．2．4 HEK 293T细胞表面GAGs的定量检测
4．2．5 ScGFP在小鼠体内的分布及稳定性分析
4．2．6小鼠各器官中GAGs的可视化检测
4．3实验结果与分析
4．3．1细胞GAGs提取及二糖组成分析
4．3．2活细胞表面ScGFP结合时间分析
4．3．3 A549细胞表面GAGs可视化检测
4．3．4 HEK 293T细胞表面GAGs的定量检测
4．3．5 ScGFP在小鼠体内的分布及稳定性分析
4．3．6小鼠各器官中GAGs的可视化
4．4本章小结
第五章GPC3均相检测方法的建立及条件优化
5．1材料与仪器
5．1．1材料
5．1．2仪器
5．2实验方法
5．2．1 GPC3抗原的克隆表达和制备
5．2．2杂交瘤细胞株的制备和筛选
5．2．3单克隆抗体的纯化制备
5．2．4 GPC3的纯化制备
5．2．6试剂添加顺序的优化
5．2．7均相体系检测时间的选择
5．2．8最适缓冲溶液的选择
5．2．9最适盐浓度的选择
5．2．10羧基石墨烯偶联抗体含量的优化
5．2．12最适ScGFP浓度的选择
5．2．13最适淬灭剂的选择
5．3实验结果与分析
5．3．3试剂添加顺序的优化
5．3．4均相体系检测时间的选择
5．3．5最适缓冲溶液的选择
5．3．6最适盐浓度的选择
5．3．7羧基石墨烯偶联抗体含量的优化
5．3．8羧基石墨烯封闭条件的优化
5．3．9最适ScGFP浓度的选择
5．3．10最适淬灭剂的选择
5．4本章小结
第六章GPC3均相检测方法在HCC诊断中的应用
6．2．2 GPC3和GPC3△GAG检测的比较
6．2．3干扰性检测
6．2．4血清中GPC3的检测
6．2．5临床HCC血清样品中GPC3的检测
6．2．6 ELISA法对临床HCC血清样品中GPC3的检测
6．3实验结果
6．3．1缓冲溶液中GPC3的检测
6．3．2 GPC3和GPC3△GAG检测的比较
6．3．3干扰性检测
6．3．4血清中GPC3的检测
6．3．5临床HCC血清样品中GPC3的检测
6．3．6新型检测方法与ELISA法在HCC诊断中的比较分析
6．4本章小结
第七章全文总结及展望
7．1 主要研究结果及意义
7．2本论文的创新点
7．3展望
参考文献
致谢
攻读博士学位期间参与的项目
攻读学位期间的获奖情况
攻读学位期间发表论文与申请专利
