TCONS_00023979在前列腺癌中的作用及其可能的调控机制的初步研究

摘要

目的：
　　1、利用高通量芯片技术获得在前列腺癌（PCa）组织与癌旁正常组织中差异表达的长链非编码RNA（lncRNAs）和mRNAs；
　　2、验证TCONS_00023979及其临近基因PML的差异表达情况，探索TCONS_00023979对临近基因PML的调控作用；
　　3、探索TCONS_00023979对前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力的影响。
　　方法：
　　1、进行高通量lncRNA及mRNA混合基因芯片检测并得到前列腺癌组织和癌旁正常组织的差异基因表达谱。
　　2、通过芯片结果、邻近编码基因信息分析以及相关文献报道筛选出其中的lncRNA分子作为研究对象。
　　3、收集13例前列腺癌根治术的组织标本用qRT-PCR方法检测TCONS_00023979及其邻近基因PML在前列腺癌组织中的表达水平，并与芯片结果相比较。
　　4、构建TCONS_00023979特异性的siRNA序列，转染入DU145和LNCaP等前列腺癌细胞下调TCONS_00023979的表达水平，并通过qRT-PCR技术筛选出干扰效果最佳的siRNA序列。
　　5、利用qRT-PCR和westernbolt技术检测TCONS_00023979表达被干扰后对PML的mRNA和蛋白质表达水平的影响，根据结果探讨TCONS_00023979对PML的调控作用。
　　6、进行MTT、平板克隆以及Transwell等细胞生物学实验检测TCONS_00023979表达水平的下调对前列腺癌细胞生长增殖、侵袭能力的影响。
　　结果：
　　1、高通量芯片分析结果显示共有多个lncRNA以及mRNA分子差异性表达，最终依据基因注释信息及相关文献报道，获得了9个mRNAs和相应的13个lncRNAs，其中包括PML和TCONS_00023979。
　　2、多步骤筛选结果提示TCONS_00023979可能是与前列腺癌相关的关键lncRNA分子之一，而且组织qRT-PCR验证结果显示：TCONS_00023979和PML在PCa组织中的表达水平均低于癌旁正常组织，与芯片结果保持一致。
　　3、下调TCONS_00023979的表达后进行qRT-PCR和westernblot技术检测后发现PML的mRNA和蛋白质表达水平也明显下调。
　　4、干扰TCONS_00023979的表达后可导致DU145、LNCaP等前列腺癌细胞的生长增殖、侵袭能力明显增强。
　　结论：
　　1、通过高通量基因芯片筛选分析，我们新发现了一批与前列腺癌相关的mRNAs和lncRNAs。
　　2、TCONS_00023979对临近基因PML具有正性调控作用。
　　3、TCONS_00023979能够抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭，而且可能是通过正性调节PML来发挥作用的。