低强压下He-Ne激光对功能性前伸大鼠下颌髁突改建的影响及VEGF表达变化的研究

摘要

实验目的:评价低强度He-Ne激光对髁突软骨改建的影响，本实验以大鼠为实验对象，制作安氏Ⅱ类错（牙合）畸形的功能性前伸下颌矫治模型，显微测量髁突软骨厚度，并运用免疫组化的方法检测VEGF的表达情况。
　　实验方法:选用5周龄雄性Sprague-Dawley大鼠60只，随机分成实验组、对照组和空白组（3、7、14、21天）。实验组及对照组大鼠上切牙用磷酸锌水门汀粘斜面导板，并用正畸透明压膜材料制作颈圈以防止大鼠前爪及后腿破坏斜面导板。实验组大鼠戴上斜面导板后即刻用20mw的632.8nm的氦氖激光（helium-neon laser）照射颞下颌关节区，每天一次，每次9分钟/侧，每只双侧照射。对照组大鼠仅佩戴斜面导板及颈圈，不接受激光照射。空白组大鼠无任何实验处理。所有实验动物均软食饲养，自由饮水，置于23℃恒温实验环境。实验后3、7、14、21天分别取双侧髁突，放于4℃恒温冰箱中，用4％多聚甲醛固定24h，13％EDTA脱钙10天，再逐级酒精脱水，石蜡包埋。石蜡切片进行HE染色，测量髁突软骨厚度;免疫组化方法检测VEGF的表达。
　　实验结果:
　　1、根据磨牙关系可见实验组及对照组大鼠下颌前伸后咬合无偏斜，平均前伸量无统计学差异。
　　2、功能性前伸下颌后引起大鼠髁突软骨厚度的变化。镜下见实验组及对照组比空白组关节后间隙增宽，前间隙缩窄，软骨中份和后份细胞体积增大，软骨层厚度增加，肥大层和成熟层细胞核肥大深染，细胞间质增加。
　　3、实验组与空白组髁突7天即呈现出明显差异，而对照组直到实验后14天才能出现统计学意义。实验组与对照组相比髁突软骨中份、后份14天组及21天组增厚显著。
　　4、VEGF阳性DAB显色表现为软骨细胞的胞浆、包膜均可见棕黄色深染颗粒。染色分布于髁突软骨的肥大层及成熟层;增殖层弱表达，纤维层未见VEGF阳性表达。实验组髁突软骨中份、后份的表达增强，第7天即与空白组出现差异，而对照组一直到第14天组才与空白组出现有统计学意义的差异，且实验组与对照组相比较，在第14天组及第21天组，VEGF的平均光密度值明显增强，p＜0.01，有显著统计学意义。
　　实验结论:
　　1、对下颌前伸的大鼠颞下颌关节应用低剂量的He-Ne激光，可以加速髁突软骨的改建。
　　2、He-Ne激光使下颌前伸的大鼠髁突软骨VEGF表达增加，加速骨替代软骨的进程，促进邻接区域骨中血管向软骨侵入，从而加速软骨的改建，促进下颌骨生长，为缩短功能性前伸下颌时间提供了新的可能。