DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的内皮细胞诱导巨噬细胞活化和迁移的影响

摘要

第一部分 LPC损伤的HUVE-12细胞对MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响
　　目的:
　　研究溶血磷脂酰胆碱(lyso-Phosphatidylcholine，LPC)能否损伤人脐静脉内皮细胞系细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVE-12)，对人单核细胞(human acute monocytic leukemia cellline，THP-1)源性巨噬细胞(macrophages，MΦ)增殖、迁移、形成泡沫细胞的影响。
　　方法:
　　1、用LPC诱导氧化损伤HUVE-12，制备氧化应激损伤内皮细胞模型;用Transwell制备氧化应激损伤的HUVE-12与THP-1源性MΦ共培养的模型。
　　2、用MTT法、划痕实验法、油红O染色法和总胆固醇含量测定分别检测损伤的HUVE-12对THP-1源性MΦ增殖、迁移形成泡沫细胞的影响，Western Blot检测HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。
　　结果:
　　随着LPC浓度增加，HUVE-12活性氧的产生、LDH的含量都增加，LPC损伤HUVE-12上调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65表达和共培养条件培养基IL-1β的含量，促进共培养系统中MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。
　　第二部分 DFMG干预LPC损伤HUVE-12细胞对MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响
　　目的:
　　研究活性新化学实体，7-二氟甲氧基-5，4'-二甲氧基金雀异黄素（7-difluoromethoxy-5，4'-dimethoxygenistein，DFMG）是否抑制LPC氧化损伤HUVE-12细胞对THP-1源性MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的促进作用。
　　方法:
　　用MTT法、划痕实验、油红O染色法和总胆固醇含量测定检测浓度梯度DFMG对LPC损伤HUVE-12诱导THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞的影响，Western Blot检测HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。
　　结果:
　　DFMG降低共培养条件培养基的IL-1β含量以及下调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白表达，抑制共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。
　　第三部分 DFMG调节TLR4信号通路对LPC损伤HUVE-12细胞诱导MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响
　　目的:
　　研究DFMG抑制氧化损伤的HUVE-12促进THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞的作用是否涉及调控HUVE-12细胞的TLR4信号通路。
　　方法:
　　用MTT法、划痕实验、油红O染色法和总胆固醇含量测定检测TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂（Lipopolysaccharides，LPS）、白介素-1受体特异性拮抗剂（Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）和DFMG对LPC损伤HUVE-12诱导THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞，western blot检测HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。
　　结果:
　　CLI-095、IL-1Ra、DFMG均能降低共培养条件培养基的IL-1β含量和下调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达，抑制共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。LPS增加共培养条件培养基的IL-1β含量和上调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达，促进共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。
　　结论:
　　1.在transwell共培养基系统中，LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。
　　2.DFMG抑制LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞作用。
　　3.DFMG抑制LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞作用与其HUVE-12细胞的TLR4信号通路相关。

目录

摘要

引言

第一部分 LPC损伤的HUVE-12对MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响

1 材料与试剂

2 实验方法

3 结果

3．1 LPC氧化损伤HUVE-12细胞造模结果

3．2 LPC氧化损伤HUVE-12细胞与THP-1源性MΦ共培养造模结果

3．3 LPC氧化损伤HUVE-12细胞与THP-1源性共培养对TLR4信号通路的影响

1．4 讨论

第二部分 DFMG干预LPC损伤HUVE-12对MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响

1 材料与试剂

2 实验方法

3 结果

3．1 DFMG抗LPC损伤HUVE-12细胞对THP-1源性MΦ功能的影响

3．2 DFMG抗LPC损伤HUVE-12细胞与THP-1源性共培养对TLR4信号通路的影响

4 讨论

第三部分 DFMG调节TLR4信号通路对LPC损伤HUVE-12细胞诱导MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞的影响

1 材料与试剂

2 实验方法

3 结果

3．2 DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的HUVE-12对MΦ迁移的影响

3．3 DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的HUVE-12对MΦ形成泡沫细胞的影响

3．4 DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的HUVE-12与MΦ共培养分泌IL-1β的影响

3．5 DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的HUVE-12与MΦ共培养对HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-κBp65表达的影响

4 讨论

结论

参考文献

综述 内皮细胞与巨噬细胞的相互作用在动脉粥样硬化中的研究进展

英文缩写词表

攻读硕士学位期间的主要成果

致谢

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