β1整合素对淋巴瘤细胞增殖、迁移和药物敏感性的影响及姜黄素的调节作用

摘要

第一部分 姜黄素对Raji细胞增殖、凋亡和细胞周期作用的研究 [目的]研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制，对比研究其对Raji细胞和人单个核细胞的细胞毒性。 [方法]用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响，Annexin-V/PI双标流式术法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响，PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。 [结果](1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素处理组Raji细胞周期发生变化，细胞周期被阻滞于G0/G1和G2/M期，S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。 [结论]姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡，从而抑制Raji细胞增殖。姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用，而选择性作用于肿瘤细胞。 第二部分 β1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄素的影响 [目的]研究β1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄素的影响 [方法]免疫组化法检测B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和反应性增生淋巴结中β1整合素表达的差异；流式细胞术检测Raji细胞、Daudi细胞和正常人外周血淋巴细胞β1整合素表达的差异；流式细胞术和RT-PCR方法检测姜黄素对Raji细胞β1整合素mRNA和蛋白水平的影响； [结果](1)β1整合素在Raji细胞中高表达，Daudi细胞及正常人外周血B淋巴细胞中β1整合素表达水平很低。(2)T细胞淋巴瘤淋巴结和反应性增生淋巴结β1整合素麦达显著低于B细胞淋巴瘤淋巴结。(3)低浓度姜黄素即能显著抑制β1整合素的表达。 [结论]β1整合素在Raji细胞中高表达，在正常人淋巴结和外周血淋巴细胞中低表达，提示β1整合素是一个有前途的淋巴瘤抗粘附治疗靶点。而且β1整合素在不同类型淋巴瘤中的表达水平不同，提示β1整合素对于淋巴瘤的鉴别诊断具有重要意义，以β1整合素为靶点研究药物的抗淋巴瘤作用可能具有重要意义。姜黄素能显著抑制β1整合素的表达，有希望成为抑制淋巴瘤侵袭、播散的新药。 第三部分 姜黄素对Raji细胞化疗敏感性的影响及其机制的研究 [目的]研究FN/整合素途径在调节淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性中的作用及姜黄素体外增敏淋巴瘤细胞的作用及其机制。 [方法]采用MTT法检测阴性对照组、Cur组、ADR组、Cur+ADR组、FN+ADR组、FN+anti-integrin+ADR、Cur+FN+ADR组各组细胞的增殖抑制率。金氏公式进行联合用药分析。 [结果]Cur与ADR合用对Raji细胞呈单纯相加至增强效应。Raji细胞与FN作用后，再给予半致死剂量的阿霉素(400mg/L)，细胞增殖抑制率为32.5％，与未加FN的Raji细胞(抑制率53.1％)相比，两组之间有非常显著差异(P＜0.01)。将抗β1整合素抗体阻断Raji细胞上与FN结合的β1整合素，阿霉素对细胞的抑制率恢复至54.6％。Raji细胞株与FN和6.25μmol/L姜黄素同时培养，阿霉素对其的抑制率为59.2％，显著高于FN+ADR组(P＜0.01)。 [结论]FN/β1整合素参与调节Raji细胞对阿霉素的敏感性，姜黄素可能通过下调整合素的表达抑制FN/β1整合素途径的激活来增加Raji细胞株对化疗药物的敏感性。 第四部分 姜黄素对Raji细胞粘附侵袭的调节作用 [目的]研究姜黄素调节SDF1/CXCR4和FN/β1整合素途径对B淋巴瘤细胞系Raji细胞粘附和迁移的影响，探讨姜黄素抑制淋巴瘤侵袭的机制。 [方法]本实验共分7组，阴性对照、FN、SDF、FN+抗β1整合素抗体、SDF+抗β1整合素抗体、SDF+抗CXCR4抗体、姜黄素+FN、姜黄素+SDF各组，采用粘附、迁移试验检测各组Raji细胞侵袭能力的差异。 [结果]在体外SDF1和FN均能增加Raji细胞粘附、浸润能力，并且此作用能分别被抗β1整合素抗体和抗CXCR4抗体阻断。姜黄素能显著抑制Raji细胞在FN上的粘附以及FN诱导的迁移，并且呈剂量依赖性。姜黄素对SDF1诱导的Raji细胞粘附和趋化作用影响不明显。 [结论]FN/β1整合素和SDF1/CXCR4在Raji细胞的粘附迁移过程中起重要作用，SDF1可能通过调节β1整合素而增强Raji细胞的粘附和迁移作用。姜黄素主要通过抑制β1整合素的作用来降低Raji细胞的侵袭能力，具有良好的临床应用潜力。

目录

英文缩写词及中文对照

摘要

前 言

第一部分 姜黄素对 Raji细胞增殖、凋亡及细胞周期作用的研究

第二部分 β1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄素的影响

第三部分姜黄素对Raji细胞化疗敏感性的影响及其机制的研究

第四部分 姜黄素对Raji细胞粘附侵袭的调节作用

全文小结

综述整合素在恶性血液病中的研究进展

致谢