1，25（OH）D及其受体在川崎病发病中的作用及分子学机制研究

摘要

第一部分1，25(OH)2D3及受体在Jurkat细胞中的作用及其分子学机制研究 目的：研究1,25(OH)2D3与受体在Jurkat细胞中的表达和作用以及它们所介导的分子学机制。为进一步探讨1,25(OH)2D3对人外周血T细胞的作用提供理论基础。 方法：给予不同浓度1,25(OH)2D3干预培养Jurkat细胞，应用WesternBlot技术检测1,25(OH)2D3受体(VDR)的表达以及介导其中的STAT3，ERK，NF-KB，P53等4条信号通路的表达。 结果：1,25(OH)2D3浓度为10-1mg/ml时为最大无毒剂量。VDR在Jurkat中有表达，但其表达不受1,25(OH)2D3浓度控制。ERK信号通路可以被1,25(OH)2D3抑制，而且浓度越高，作用越大。NF-KB在Jurkat细胞中呈持续活化状态，而这一现象与1,25(OH)2D3无关。1,25(OH)2D3可以启动P53通路，而且受其浓度调节。STAT3通路不受1,25(OH)2D3影响。 结论：1，25(OH)2D3对Jurkat细胞的生长有抑制作用。NF-KB，P53通路参与介导调控。 第二部分1，25(OH)2D3与受体在川崎病外周血T细胞中的作用及其分子学机制研究 目的：研究1,25(OH)2D3和受体在川崎病外周血T细胞中的作用以及它所介导的分子学机制。 方法：取30例川崎病患儿外周血，60例感染发热患儿和60例正常儿童外周血，分别采用T细胞分离柱分离外周血T细胞，植物血凝素刺激培养。应用WesternBlot技术检测维生素D受体(VDR)的表达，以及与其相关的有介导作用的STAT3，ERK，NF-KB，P53等4条信号通路的表达。并进一步探索1,25(OH)2D3对以上4条信号通路的调节作用。 结果：本实验成功的进行了体外原代培养T细胞。并检测到1,25(OH)2D3对外周血T细胞的最大无毒剂量为10-3mg/ml。VDR在川崎病外周血T细胞中的表达明显高于感染发热患儿和正常儿童。STAT3只在川崎病外周血T细胞被活化，而且其特异性较强。P53蛋白不表达。在这一过程中，ERK通路被激活，NF-κB途径也被激活。1,25(OH)2D3对P53和ERK通路有一定的调节作用。体外给予1，25(OH)2D3干预培养时，ERK信号通路的活化被抑制，P53蛋白被激活。 结论：川崎病外周血T细胞中信号传递通路紊乱：细胞凋亡通路被抑制，增殖通路被过度激活，从而导致T细胞异常活化。 第三部分STAT3信号通路在川崎病发病中作用机制研究 目的：在第二部分实验中发现STAT3只在川崎病患儿外周血T细胞中被活化，其特异性较强，因此在此部分重点研究川崎病外周血T细胞中STAT3通路特异性活化的原因，以及STAT3-SOCS1在川崎病发病中作用，探索川崎病发病的分子学机制。 方法：利用通用载体T载体构建SOCS1-pMD18T质粒，再采用基因工程技术构建SOCS1-pEGFPC1质粒。将含绿色荧光的SOCS1报告基因转入外周血单个核细胞。应用WesternBlot技术检测SOCS1，STAT3的表达。 结果：成功构建SOCS1-pMD18T质粒和SOCS1-pEGFPC1质粒并成功进行转染。转入细胞的SOCS1报告基因发挥其功能，抑制STAT3表达。 结论：SOCS1基因表达的上调可以使川崎病患儿外周血单个核细胞中SOCS1-STAT3达到平衡状态，为体内实验提供了可行的理论依据。

目录

摘要

英文缩写词及中文对照

前言

第一部分1,25(OH)2D3与受体在Jurkat细胞中的作用及其分子学机制研究

第二部分1,25(OH)2D3与受体在川崎病外周血T细胞中的作用及其分子学机研究

第三部分STAT3信号通路在川崎病发病中作用机制研究

小结

综述1,25(OH)2D3及其受体免疫调节作用的新进展

攻读博士期间发表文章

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