一个新家蝇抗菌肽的分离纯化和部分性质研究

摘要

抗菌肽是生物体内产生的一种具有抗菌功能的小分子多肽，是生物先天非特异性免疫的重要组成部分。这类活性多肽具有分子量小、热稳定性强、水溶性好、抗菌谱广、杀菌活力高的特点，能杀灭对传统抗生素产生抗性的菌株，其杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变，使其可能成为抗生素的理想替代物。此外，抗菌肽对一些病毒和寄生虫也有抑杀作用；还能特异性地抑制某些肿瘤细胞的生长，且对人体正常细胞无害，这给抗癌药物的开发带来了新的希望。抗菌肽作为一大类新型抗菌机理的天然多肽抗生素和抗癌药物，具有广泛的应用前景。寻找新的抗菌肽已成为生命科学领域中的热门研究课题之一。
　　 本文从野生家蝇中分离出一个新抗菌肽，并对其部分性质进行了研究。家蝇(Musca domestica)属昆虫纲，双翅目，环裂亚目、蝇科，是我国大部分地区最常见、数量最多的一种蝇类。家蝇中存在大量抗菌活性物质，对抗菌药物的开发具有重要的意义。但家蝇中抗菌肽的种类较多，成分复杂，很难分离纯化出一个单一抗菌肽，目前国内外对其研究较少。本研究利用短时沸水处理、稀醋酸低温浸提、海藻酸吸附、稀盐酸低温洗脱、盐析、Sephadex G25 凝胶过滤、CMC23 弱阳离子交换柱层析、反相高效液相色谱层析、电洗脱回收等方法，结合高灵敏度的杀菌活性检测手段，从家蝇蛆中分离纯化出一个20 kD的新抗菌肽，对革兰氏阳性菌如苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis)、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）均有杀灭作用。采用胞内荧光测钙技术，发现mM 级浓度的此抗菌肽能引起大鼠胰腺β-细胞胞内钙浓度升高，且这种效应具有持续性。