小脑神经元中GABAB受体介导的CREB信号通路的初步研究

摘要

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)是在脊椎动物的中枢神经系统中广泛分布的一种抑制性神经递质，通过与GABA受体结合而发挥其生物学功能。在神经细胞中存在两类GABA的受体，其中GABAB 受体属于代谢型受体，介导缓慢的、持续时间较长的抑制性效应。GABAB受体是由GB1和GB2两种亚基组成的异源二聚体，在神经元中广泛存在，并参与多种生理过程。有研究表明在GABAB 受体促进神经元存活的过程中涉及CREB（cAMP 反应元件结合蛋白)的激活，但具体的分子机制还不清楚。
　　 本文主要以小鼠小脑颗粒神经元（CGN）为研究对象，研究了GABAB受体激活对CREB激活的影响。首先用GABAB受体的特异性激动剂baclofen刺激CGN，发现GABAB受体的激活能够瞬时激活CREB，在刺激10分钟时CREB磷酸化达到最大水平，随后逐渐降低。GABAB受体的特异性抑制剂CGP54626能够阻断GABAB受体介导的CREB的磷酸化。用特异性作用于GB2亚基 HD区的激动剂CGP7930激活GABAB受体，发现CGP7930也能够瞬时激活CREB。Gi/o蛋白的抑制剂PTX能够抑制baclofen对CREB的激活作用，说明Gi/o蛋白参与了GABAB受体介导的CREB的激活。用PLC的抑制剂U73122和钙离子螯合剂BAPTA预处理CGN，在baclofen的刺激下，发现U73122和BAPTA都抑制了CREB的激活，说明PLC通过Ca2+参与GABAB受体介导的CREB激活。在共表达GABAB1和GABAB2质粒的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）中，用RNAi干扰胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）表达后发现，baclofen诱导的CREB激活受到抑制。分别用Src的抑制剂PP2和PI3K的抑制剂LY294002预处理CGN，在baclofen的刺激下，CREB的激活也都被抑制了。
　　 总之，本文研究揭示了在CGN细胞中，GABAB受体可以通过转激活IGF-1R介导的CREB激活。进一步的研究表明，这种相互作用依赖Gi/o蛋白、PLC和胞质Ca2+，而激活后的IGF-1R通过Src/PI3K激活 CREB。该结果为进一步研究GABAB受体-CREB 信号通路的精细激活机制，以及研究该通路的生理功能，提供了一定的研究基础。

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文摘

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声明

1 绪 论

2 实验技术原理

3 材料与方法

4实验结果与讨论

致 谢

参考文献

附录