褪黑素通过AMPK-mTOR信号通路介导的自噬在神经元缺血缺氧损伤中的作用研究

摘要

目的观察氧糖剥夺(OGD)对神经元凋亡及自噬的影响,研究褪黑素(MT)对OGD所致神经元损伤的作用,并以AMPK-mTOR信号通路介导的自噬为靶点探讨褪黑素在OGD所致神经元损伤中发挥保护作用的分子机制。方法将培养成熟的原代神经元分为对照组、OGD处理组、氧糖剥夺+褪黑素(OGD+MT)处理组、氧糖剥夺+褪黑素+细胞自噬抑制剂(OGD+MT+3-mA)处理组及氧糖剥夺+褪黑素+化合物C(OGD+MT+Cpd C)处理组。OGD处理组采用免疫荧光染色和免疫印迹法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达;OGD+MT处理组用褪黑素对神经元进行预处理前/后,检测神经元凋亡相关指标,观察OGD所致神经元损伤程度,并采用免疫荧光染色和western blot等方法检测神经元自噬;OGD+MT+3-mA处理组使用细胞自噬抑制剂(3-mA)处理神经元后探讨褪黑素对神经元凋亡及自噬的影响;OGD+MT+Cpd C处理组使用AMPK抑制剂化合物C(Cpd C)处理神经元后,检测AMPK-mTOR信号通路关键分子表达水平,探索褪黑素对AMPK-mTOR通路的调控作用。结果OGD可显著增加神经元凋亡及自噬,并阻断自噬流的通畅;褪黑素可以显著减轻神经元凋亡,激动自噬,并维持自噬流的通畅;细胞自噬抑制剂及化合物C可以逆转褪黑素对OGD所致神经元损伤的保护作用。结论褪黑素可以通过AMPK-mTOR信号通路激活自噬,从而减轻OGD所致神经元损伤。