毛细管电泳法研究铁卟啉和去铁胺之间的相互作用

摘要

研究药物与致病因子之间的相互作用，可以对药物在体内产生的作用机制有所了解，进而为药代动力学和药理毒理方面的研究提供参考依据。这在新药物的开发过程中具有重要作用。亲和毛细管电泳法(ACE)是被广泛使用的一种测定物质之间结合常数的方法。它是将一系列不同浓度的受体(或配体)作为添加剂溶于缓冲液中，制备运行溶液，然后将固定浓度的配体(或受体)作为样品。受、配体的结合物对配体的表观淌度产生影响，通过配体迁移率的变化可以求出结合常数。
　　 多个研究证明铁螯合剂去铁胺(DFO)能与铁卟啉(hemin)形成DFO-hemin复合物，进而影响hemin导致的组织损伤。本文首次使用亲和毛细管电泳的方法，研究DFO和hemin相互作用的一些化学信息，为在临床上广泛应用的DFO，提供一些药理学和毒理学方面的有用信息。
　　 本文对电泳实验的各个条件进行考察，确定了最佳的电泳操作条件。选用hemin为样品，20 mmol/L硼酸溶液(pH=8.6)为缓冲液，DFO作为缓冲液添加剂。选用管总长为60.2 cm，有效长度为50 cm的毛细管进行实验。首先，研究了分别在以下温度时(20℃、25℃、30℃、37℃)，不同浓度的DFO(10～80 μM)对hemin(80 μM)迁移率的影响，运用Scatchard方程拟合，计算出了温度在20℃、25℃、30℃、37℃时，DFO和hemin的结合常数K分别为12.43×104 M–1、10.113×104 M–1、7.57×104 M–1、3.46×104M–1。结果表明，随着温度的升高，结合常数逐渐降低，但DFO与hemin在20～37℃之间都存在较强的结合能力(K值的数量级为104)。依据Van’t Hoff方程，求出20～37℃
　　 时，结合反应的吉布斯自由能变ΔG在-26.94 ～-28.58 kJ·mol–1之间。通过将lnK对1/T进行线性拟合，由斜率及截距可计算出DFO与hemin相互作用的热力学参数焓变ΔH为–56.61 kJ·mol–1、熵变ΔS 为–94.77 J·mol–1?K–1。以上热力学数据表明，该结合反应是放热且自发进行的。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 绪论

2 实验部分

3 实验结果与讨论

4 全文总结

致 谢

参考文献

附录 攻读硕士学位期间完成的主要论文