化疗药物白消安-环磷酰胺联用建立同种异基因小鼠的移植物抗宿主病(GVHD)模型

摘要

GVHD(移植物抗宿主病)是临床上骨髓移植(BMT)的一种严重的并发症。它的发生与宿主的免疫抑制有着重要的关系。在体内试验中,我们建立了一种利用全身射线照射(TBI)来获得小鼠免疫抑制的模型。并且,这个模型已经广泛的用于小鼠器官移植的各种实验中。
　　然而,临床上使用具有免疫抑制功能的化疗药物正越来越多的代替了射线照射成为免疫抑制的主要手段,因此,我们有必要建立一种基于化疗药物的小鼠GVHD模型,以便更加紧密的贴近临床工作的实际并减少处理措施不同造成的差异。
　　本研究选取了雌性BalB/c小鼠作为受者,经由白消安(busulfan,本文中以后简写为BU)和环磷酰胺(cyclophsphamid,本文中以后简写为BU)腹腔注射行免疫抑制处理,再以雄性C57BL/6小鼠作为供体,提取一定量的骨髓和脾细胞经腹腔注射输入受体体内,以模拟临床上骨髓移植(BMT)的情形。然后观察受者移植后的GVHD表现并进行评分,并检测器官和血液中的浸润情况等指标(采用免疫组化技术和流式细胞术),以观察GVHD对主要实体器官(皮肤、大肠、肝)的损害情况。考虑到GVHD的典型炎症预期,提供移植前输注HMGB1抗体的对照组进行对照。
　　结果显示,经上述处理后的受者小鼠,在移植后表现出了皱毛、皮损和体重减轻等典型GVHD等症状,模型的平均生存时间为12.23±2.41天。流式细胞术和免疫组化显示血液和皮肤、大肠和肝等脏器浸润明显。而HMGB1抗体对照组则浸润不明显。说明经由化疗药物BU-CY联用诱导小鼠的免疫抑制后再行BMT,能够有效的激发GVHD,是建立小鼠GVHD模型的又一可选方法。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

I 材料与试剂

一、小鼠

二、化疗药物

三、培养基

四、抗体

五、主要试剂配制

六、主要仪器

七、其他相关材料

II 实验方法

一、摸索适合的化疗药物剂量以备建模

二、移植

三、移植后

结果

一、BU-CY处理可在同种异基因移植后产生GVHD

二、合适剂量的BU-CY能够提供生存率适合观察和研究的GVHD模型

三、免疫组化显示了实验组的血管周围有大量的淋巴细胞浸润，而预先注射HMGB1抗体的对照组却显著减轻，提示了HMGB1在GVHD中的重要作用

四、流式细胞术显示施行骨髓细胞和脾细胞移植后，小鼠静脉血中淋巴细胞含量

讨论

结论

参考文献

致谢