水杨酸钠对LPS刺激后人THP-1细胞的活性、糖代谢及细胞因子分泌的影响

摘要

【目的】验证水杨酸钠是否通过激活AMPK蛋白抑制细菌脂多糖（LPS）刺激后人单核细胞THP-1的细胞活性及糖酵解，并影响炎症因子的表达。
　　【方法】
　　1、培养THP-1细胞，分别给予或不给不同浓度的LPS及水杨酸钠刺激THP-1细胞，培养24h后用MTT、LDH和细胞流式PI染色的方法检测细胞活性，培养8h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法检测细胞因子TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10的mRNA表达水平，培养24h后用ELISA试剂盒检测细胞上清中TNF-α，IL-6，IL-10，IL-1β的含量，培养24h和48h后取细胞上清检测细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量及氧分压含量。
　　2、培养THP-1细胞，分别给予或不给LPS、水杨酸钠和AMPK蛋白抑制剂compound C处理THP-1细胞，培养0.5h后用Western blotting的方法检测磷酸化AMPKα及AMPKα总蛋白水平。
　　3、培养THP-1细胞，提前半小时给予AMPK抑制剂compound C处理细胞后，再给予或不给LPS及水杨酸钠，培养8h后，用qRT-PCR的方法检测细胞因子TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10的mRNA表达水平。
　　【结果】
　　1、MTT实验、LDH实验和细胞流式PI染色的方法证实5mM水杨酸钠可加剧10ug/ml LPS刺激后的THP-1细胞的死亡；水杨酸钠可使100ng/ml LPS刺激后的THP-1细胞IL-1β蛋白的分泌减少，IL-6和IL-10的mRNA表达量降低，TNF-α的mRNA表达及蛋白分泌没有变化；而用10ug/ml LPS刺激细胞时，水杨酸钠可以抑制IL-1β、IL-6和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌，但同时促进了TNF-α的mRNA表达及蛋白分泌；水杨酸钠可以减少LPS刺激后THP-1细胞的葡萄糖消耗量和乳酸生成量。
　　2、LPS刺激后THP-1细胞的AMPKα蛋白磷酸化水平与正常组相比没有差异，水杨酸钠刺激后THP-1细胞的AMPKα蛋白磷酸化水平比正常组高2.8倍，而LPS+水杨酸钠组与 LPS组相比 AMPKα蛋白磷酸化水平也升高2.8倍，LPS+水杨酸钠+compound C组与LPS+compound C组相比AMPKα蛋白磷酸化水平有降低的趋势，所有组AMPKα总蛋白的相对表达量没有明显变化。
　　3、使用AMPK抑制剂compoundC后，水杨酸钠对10μg/ml LPS刺激后THP-1细胞促进TNF-αmRNA和抑制IL-10 mRNA表达的作用消失，而水杨酸钠对IL-1β和IL-6的抑制作用仍存在。
　　【结论】
　　1、高浓度水杨酸钠可以加重大剂量 LPS刺激后 THP-1细胞的死亡；在小剂量 LPS刺激细胞时，水杨酸钠主要通过抑制 IL-1β的生成发挥抗炎作用，当使用大剂量LPS刺激细胞时，水杨酸钠既能剂量依赖性抑制促炎因子IL-1β和IL-6以及抗炎因子IL-10表达，又能促进促炎因子TNF-α表达；水杨酸钠还可以抑制LPS刺激后THP-1细胞的糖酵解过程，影响细胞的能量代谢。
　　2、水杨酸钠可以上调LPS刺激后THP-1细胞AMPK蛋白磷酸化水平，compound C可以部分抑制水杨酸钠对AMPK蛋白的磷酸化作用。
　　3、水杨酸钠可以通过上调AMPK磷酸化水平影响细胞因子TNF-α和IL-10的表达，还可能通过AMPK改变了LPS刺激后细胞的糖代谢以及抑制THP-1细胞的活性。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

综述: 阿司匹林及其代谢产物水杨酸钠对脓毒症的抗炎机制及研究进展

附 录1英文缩略词表

致谢