敲除DAPK1死亡结构域对缺血性脑卒中神经元保护作用研究

摘要

背景：
　　死亡相关蛋白激酶(DAPkinase,DAPK)是一类新的钙离子/钙调蛋白依赖激酶。最初，科学家主要研究它在肿瘤的发生发展与肿瘤转移方面的作用。目前有研究证实DAPK1同时也参与缺血性脑中风时的继发性神经元死亡。脑卒中是神经系统的常见病及多发病，死亡率和致残率很高，往往给患者带来诸多不良后果。因此对脑卒中发病机制的研究显得尤其重要。DAPK1蛋白质主要由6个部位组成，科学家发现在缺血性脑卒中诱导神经细胞死亡起主要作用的是DAPK1的死亡结构域(Death Domain)，该区可以与多种蛋白结合，引起细胞死亡，而目前还没有报告关于在小鼠整体水平上敲除DAPK1死亡结构域的研究。
　　目的:
　　1.论证敲除DAPK1-DD对缺血性脑卒中神经元的保护作用
　　2.探讨敲除DAPK1-DD对小鼠空间学习记忆的影响
　　材料与方法:
　　首先，为敲除DAPK1-DD，我们运用转基因技术在DAPK1的第25个内含子和第27个启动子的下游插入LoxP位点制造flox小鼠，然后让其与CaMKIIα-Cre小鼠杂交，在小鼠80天左右用他莫昔芬诱导cre的表达，达到敲除DAPK1-DD的目的。运用免疫组化的方法验证cre的表达。敲除DAPK1-DD之后我们将进行水迷宫测试检测小鼠空间学习记忆能力。为论证敲除DAPK1-DD对脑缺血有保护作用，我们对脑缺血模型(MCAO)小鼠进行了TTC染色和核磁共振成像(MRI)，在体外实验中，我们在原代培养的神经细胞上进行糖氧剥夺实验(OGD)后再对其进行Tunel染色。
　　结果:
　　1.成功构建DAPK1-DD敲除小鼠模型
　　2.部分敲除DAPK1-DD对小鼠的生长发育及自主行为没有影响
　　3.部分敲除DAPK1-DD对小鼠学习记忆没有影响
　　4.整体水平上，敲除部分DAPK1-DD对脑缺血无保护作用
　　5.原代神经元模型，敲除DAPK1-DD对神经元有保护作用
　　结论:
　　DAPK1在神经系统疾病中起着重要的作用，本课题通过Cre-LoxP重组酶系统与转基因技术敲除神经细胞中的DAPK1-DD，不仅验证了DAPK1-DD在脑卒中时神经细胞死亡所起的作用，也为致力于研究缺血性脑卒中临床治疗药物提供了理论依据。

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封面

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1.主要实验仪器

2.主要试剂

3.制作转基因小鼠及其转基因小鼠的鉴定

4.行为学检测

5.大脑中动脉梗阻（MCAO）

6.细胞学实验

结果

1.成功构建DAPK1-DD敲除小鼠模型

2.部分敲除DAPK-DD后对小鼠的生长发育、自主行为没有影响

3.部分敲除DAPK-DD后对小鼠学习记忆没有影响

4.在整体水平，仅敲除部分DAPK1-DD对脑中风无保护作用

5在细胞水平，敲除DAPK1-DD对脑缺血有保护作用

讨论

小结

下一步工作

创新点

参考文献

综述: DAPK1与神经系统疾病

附录一 中英文缩略词对照表

致谢