mCRC患者初始治疗前CEA水平与西妥昔单抗疗效相关性及其机制探讨

摘要

本文分为以下几个部分进行探讨：
　　第一部分：mCRC患者CEA水平与西妥昔单抗疗效分析
　　目的：探讨mCRC患者初始治疗前血CEA水平与西妥昔单抗治疗疗效的相关性。
　　方法：收集并整理2013-2015年在武汉协和医院肿瘤中心接受西妥昔单抗联合化疗的mCRC患者信息资料，以西妥昔单抗治疗前CEA10ng/ml为界分为CEA升高组和CEA正常组，回顾分析mCRC患者临床病理特征与西妥昔单抗治疗疗效及生存预后的关系。
　　结果：按照入选标准筛选患者，共纳入20例mCRC，其中CEA升高组13例，CEA正常组7例。CEA升高组接受西妥昔单抗治疗后疾病控制率（DCR）高于CEA正常组（92％VS28%），组间差异具有统计学意义（Fisher精确检验， P=0.007）；而性别、年龄、肿瘤原发灶部位、转移范围与DCR无明显相关。CEA升高组总生存期（OS）均值及中位数（个月）均高于CEA正常组（18.7 VS14.2，18 VS9），组间差异无统计学意义（Log rank检验，P=0.339）；CEA升高组无病生存期（PFS）均值及中位数（个月）均高于CEA正常组（7.6VS5，7VS0），组间差异无统计学意义（Logrank检验，P=0.334）。
　　结论：mCRC患者治疗前CEA升高组较CEA正常组在接受西妥昔单抗治疗后获得较好的DCR。比较患者接受西妥昔单抗治疗后OS、PFS的均值和中位数，治疗前CEA升高组较CEA正常组均高，但差异无统计学意义。
　　第二部分：EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与CEA表达相关性分析
　　目的：观察EGF对多种CRC细胞促增殖作用及其与细胞CEA表达相关性。
　　方法：MTT法检测EGF对6种CRC细胞系增殖的影响；裸鼠移植瘤模型验证EGF对CRC细胞的促增殖作用；免疫印迹技术和实时PCR分别检测细胞CEA在蛋白质和mRNA水平的表达情况；免疫印记技术检测EGF刺激CRC细胞系后，CEA和核内转录调控因子CEAR表达水平的变化；免疫组织化学技术检测皮下移植瘤组织CEA的表达情况；利用siRNA技术抑制EGFR表达后，免疫印记检测其对EGF促进细胞CEA表达及AKT、ERK磷酸化的影响。
　　结果：EGF刺激LOVO的增殖效应显著，呈剂量依赖性，且从紧密连接的上皮细胞样变为离散的梭形间质细胞样形态，而其它CRC细胞无明显增殖效应，形态学无明显变化；EGF刺激LOVO皮下移植瘤增殖效应显著，呈时间及剂量依赖性，EGF浓度为500μg/kg/d时达到最大增殖效应；仅LOVO细胞在mRNA和蛋白质水平均有CEA高表达；EGF能促进LOVO细胞CEA表达上调，并伴有CEAR表达下调；EGF实验组皮下移植瘤组织CEA表达量明显高于对照组；抑制LOVO细胞EGFR的表达后，可阻断EGF对LOVO细胞CEA表达的促进作用及AKT、ERK的磷酸化激活。
　　结论：EGF仅对在mRNA和蛋白质水平均有CEA高表达的LOVO细胞有明显的促增殖作用，并伴随间质细胞样形态改变，而对SW620、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞的增殖及形态学改变无明显影响；EGF能促进LOVO细胞CEA表达，并伴有CEAR下调；EGF通过EGFR诱导LOVO细胞AKT、ERK磷酸化和促CEA高表达。
　　第三部分：EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与RAS、EGFR状态相关性分析
　　目的：观察EGF对CRC细胞促增殖作用的大小及其与细胞RAS突变和EGFR表达的相关性。
　　方法：对6种CRC细胞进行RAS和BRAF基因测序；予以EGF刺激后，免疫印记检测CRC细胞的AKT、ERK磷酸化状态；检测6种CRC细胞EGFR表达状态。
　　结果：LOVO和HCT116为KRAS G13D突变，SW620和SW480为KRAS G12V突变，HT29和CACO2均无RAS、BRAF突变；除SW620外，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞均有EGFR高表达，而且接受EGF刺激后，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2细胞AKT、ERK发生磷酸化激活。
　　结论：EGF刺激LOVO高增殖活性与RAS突变状态无明显相关性；EGF刺激CRC细胞AKT、ERK磷酸化激活与RAS和BRAF突变状态无关，而与EGFR表达相关；EGF刺激LOVO高增殖活性与EGFR表达无明显相关性。

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缩略词表

中文摘要

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前言

第一部分：mCRC患者CEA水平与西妥昔单抗疗效分析

资料与方法

实验结果

实验结论

第二部分：EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与CEA表达相关性分析

材料与方法

实验结果

实验结论

第三部分：EGF对LOVO细胞增殖的影响及其与RAS、EGFR状态相关性分析

材料与方法

实验结果

实验结论

讨论

参考文献

综述: HnRNPM在恶性肿瘤中研究进展

附录：攻读硕士学位期间发表论文目录

致谢