二甲双胍通过下调IL6抑制卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞活性

摘要

目的：探究IL6（interleukin-6）在高级别浆液性卵巢癌间质成纤维细胞中的表达情况，以及二甲双胍对间质IL6的表达影响继而抑制肿瘤相关成纤维细胞活性的机制；
　　方法：利用在线数据库CSIOVDB和GSE40595分析3431和39例卵巢癌标本转录组数据比较IL6在卵巢癌肿瘤和间质中的表达水平；收集2014年至2016年同济医院妇科肿瘤科室高级别浆液性卵巢癌病例切片及组织进行免疫荧光和分离培养比较其IL6蛋白水平差异；比较GSE40595中IL6及其相关通路在CAFs与NOFs中表达差异，利用GSEA和TCGA数据分析IL6表达水平与CAFs活化程度的相关性；RT-PCR比较原代 CAFs中二甲双胍对炎症因子（IL-6、OPN、IL-1b、COX-2、Cyr61）的mRNA水平影响； Western Blot和免疫荧光检测二甲双胍对人胚肺成纤维细胞系（MRC5-CAFs）上述炎症因子和α-SMA在蛋白水平的影响；RT-PCR和Western Blot在MRC5-CAFs中进一步验证二甲双胍和（或） IL-6对CAFs中STAT3及属性相关基因的影响；上清刺激实验比较二甲双胍处理前（后）MRC5-CAFs CM促进肿瘤迁徙和增殖能力的差异；比较3D培养模型中二甲双胍、IL-6和Stattic处理后MRC5-CAFs对肿瘤支持作用差异；小鼠皮下瘤模型比较二甲双胍、IL6和Stattic处理后成纤维细胞促进肿瘤生长差异。
　　结果：在线数据库和病理切片中，肿瘤间质中IL6转录水平和蛋白水平均明显高于肿瘤上皮，Western Blot验证配对病人CAFs中IL6明显高于肿瘤细胞。GSE40595中CAFs的IL6及其相关通路评分均明显高于NOFs，GSEA分析提示CAFs中IL6表达水平与CAFs活化程度相关。二甲双胍能够下调CAFs中 IL6等炎症因子及α-SMA水平，并通过下调MRC5-CAFs中IL6抑制STAT3的激活以及CAFs间质属性相关蛋白表达；上清刺激和3D培养实验提示二甲双胍能够抑制CAFs的促肿瘤增殖转移能力，动物实验中二甲双胍能够抑制MRC5-CAFs活化及其促瘤作用。
　　结论：卵巢癌中IL-6高表达于间质并参与维持CAFs的间质属性，二甲双胍能够下调CAFs中IL-6表达水平抑制其活性，并抑制其促瘤作用。

目录

声明

缩略词注释

引言

材料与方法

1.实验材料

2.实验方法

3.统计分析

实验结果

1. IL6在卵巢癌肿瘤间质中高表达

2.IL6与卵巢癌CAFs活化相关

3.二甲双胍能够下调卵巢癌CAFs的IL6和α-SMA

4.二甲双胍通过下调IL6/STAT3抑制卵巢癌CAFs活性

5. 在移植瘤模型中二甲双胍通过抑制间质活性逆转 MRC5-CAFs 的促瘤作用

讨论

参考文献

第二部分综述二：甲双胍联合化疗的分子机制研究进展

致谢

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