巨噬细胞源性CCL2通过TLR4/CCR2途径招募中性粒细胞促进肝缺血再灌注损伤

摘要

研究背景：
　　肝脏缺血再灌注损伤，临床上多见于失血性休克、肝移植、肝切除术后、感染性休克等情况下，是严重影响患者生命及疾病预后的一类以肝脏免疫失调及全身性炎症反应为主要特征的多因素病理过程。
　　在肝脏缺血再灌注损伤过程中，中性粒细胞作为一类快速反应性免疫细胞，可以在多种趋化因子的作用下从骨髓动员并浸润到受损的肝脏组织中，进而造成肝损伤。参与中性粒细胞动员及浸润的趋化因子种类繁多，其中以CXCL1和CXCL2在骨髓动员过程中发挥的作用最为主要。炎性单核细胞作为细胞因子库，其动员和浸润稍晚于中性粒细胞，在肝脏缺血再灌注过程中可以释放多种趋化因子和细胞因子，从而扩大炎症反应。炎性单核细胞的动员和浸润主要依赖于CCL2-CCR2信号通路。然而，在肝缺血再灌注过程中，这两种细胞的动员和浸润的具体机制及其与体内免疫细胞间的相互作用目前仍不完全清楚。
　　研究目的：
　　1.探讨肝脏缺血再灌注过程中中性粒细胞动员的机制。
　　2.阐明免疫细胞之间和重要免疫细胞受体分子之间相互关系。
　　研究方法：
　　对野生型、CCL2-/-、CCR2-/-和TLR4-/-小鼠进行肝脏缺血1小时再灌注6小时模型的建立。从组织学、肝功能和炎性因子表达三个方面来评价肝脏损伤情况。流式细胞术检测骨髓和肝脏中性粒细胞比例及其表面CCR2的表达情况。细胞内因子染色检测肝脏组织内CCL2的细胞来源。尾静脉注射重组鼠类CCL2检测其对中性粒细胞趋化作用。利于氯磷酸二钠脂质体删除体内巨噬细胞来验证细胞间相互作用关系。
　　研究结果：
　　与野生型小鼠相比，CCL2-/-、CCR2-/-和TLR4-/-小鼠肝损伤减轻，中性粒细胞骨髓动员和肝脏浸润减少。中性粒细胞动员及浸润依赖于其表面CCR2的表达。删除肝脏枯否细胞后，肝损伤减轻，CCL2表达减少，中性粒细胞浸润减少。炎性单核细胞的动员及浸润完全依赖于CCL2-CCR2信号通路。中性粒细胞通过TLR4的激活进而活化其表面受体CCR2从而介导中性粒细胞招募。
　　研究结论：
　　肝缺血再灌注损伤时，枯否细胞分泌 CCL2招募炎性单核细胞和中性粒细胞从骨髓动员向肝脏浸润，中性粒细胞通过激活的TLR4从而活化 CCR2引起其向 CCL2趋化。研究发现了在无菌性炎性条件下，CCL2-CCR2对中性粒细胞调控的新的促炎作用。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与试剂

1.实验动物

2.实验试剂

3.实验设备

实验方法

1.小鼠的鉴定

2.肝脏缺血再灌注模型的建立

3.评价肝损伤

4.酶联免疫吸附实验（ELISA）

5.实时定量PCR

5.肝脏非实质细胞的分离

6.流式胞内因子染色

7.骨髓细胞分离

8.小鼠巨噬细胞删除

9.统计学分析

实验结果

1．CCR2-/-和CCL2-/-小鼠在I/R后肝脏损伤减轻

2．CCR2-/-和CCL2-/-小鼠在I/R后中性粒细胞骨髓动员和肝脏浸润减少

3．I/R诱导了中性粒细胞表达功能性CCR2

4．枯否细胞源性的CCL2诱导中性粒细胞向肝脏浸润

5．CCR2-/-和CCL2-/-小鼠在I/R后炎性单核细胞骨髓动员和肝脏浸润减少

6．TLR4-/-小鼠在I/R后肝损伤减轻，中性粒细胞骨髓动员及肝脏浸润减少

7．TLR4-/-小鼠中性粒细胞CCR2活化受抑制

小结

讨论

参考文献

综述: 中性粒细胞在无菌性炎症中的作用

致谢

附录一 攻读学位期间发表论文及参与课题

附录二 英文缩略词表