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N--乙酰半胱氨酸抑制Notch2信号转导的机制研究及其对神经胶质瘤生长的影响

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中英文缩略词对照表

引言

1. 实验材料与试剂

1.1实验材料

1.2实验试剂

1.3溶液的配制

1.3.1细胞及细菌培养用试剂

1.3.2感受态制备相关溶液的配制

1.3.3 DNA琼脂糖凝胶电泳试剂的配制

1.3.4 Western Blotting试剂的配制

1.4仪器和设备

2.1 细胞复苏

2.2细胞培养

2.3细胞冻存

2.4.1 Lipo2000转染

2.4.2 电转

2.5细胞总蛋白的提取

2.6 BCA法测蛋白浓度

2.7 Western Blotting

(1)样品制备

(2)制备SDS-PAGE胶

(3)电泳

(4)转膜

(5)封闭

(6)一抗孵育

(7)洗脱

(8)二抗孵育

(9)洗脱

(10)显色

(11)所得图像经Image J统计灰度值

2.8载体构建

(1)人Notch2基因的获取

(2)酶切载体

(3)构建重组质粒

(1)TRIzol法提总RNA

(2)反转录cDNA

(3)Real-Time PCR(RT-PCR)

2.10 双荧光素酶报告基因检测

2.11感受态的制备

2.12质粒的提取(天根)

2.13琼脂糖凝胶DNA回收(天根)

2.14 CCK8实验

2.15细胞周期实验

2.16 Annexin V-FITC/PI染色

2.17划痕实验

2.18 Transwell实验

2.19 GSH的检测

(1)样品的制备

(2)样品的测定

2.20 ROS的检测

2.21小鼠移植瘤模型建立

(1)裸鼠成瘤

(2)给药

(1)样品的制备

(2)染色

(1)样品的制备

(2)抗原修复

(3)灭活内源性过氧化物酶

(4)封闭

(5)一抗孵育

(6)二抗孵育

(7)显色

(8)苏木素复染

(9)脱水

(10)封片

2.24 TUNEL实验

(1)样品的制备

(2)TUNEL检测

2.25 统计分析

3.实验结果

(1)NAC能够抑制人脑神经胶质瘤细胞的增殖

(2)NAC能够有效抑制Notch信号通路的激活

(3)Notch2对神经胶质瘤细胞的增殖起主导作用

3.2 NAC能够促进Notch2经溶酶体途径降解

(1)NAC不影响Notch2的mRNA表达水平

(2)NAC促使Notch2经溶酶体途径降解

(3)Itch介导了NAC促Notch2降解的过程

(4)CRMP5不参与NAC导致的Notch2的降解过程

3.3 NAC对Notch2的抑制作用与其抗氧化作用无关

(1)NAC对Notch2的抑制作用与细胞内ROS水平无关

(2)NAC对Notch2的抑制作用与细胞内的GSH水平无关

(3)NAC抑制神经胶质瘤细胞增殖的作用与其抗氧化作用无关

3.4 NAC通过抑制Notch2信号来抑制神经胶质瘤细胞的增殖

3.5 NAC通过抑制Notch2信号促进神经胶质瘤细胞的凋亡

3.6 NAC通过抑制Notch2信号从而抑制神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭

(1)NAC通过抑制Notch2信号从而抑制神经胶质瘤细胞的迁移

(2)NAC通过抑制Notch2信号从而抑制神经胶质瘤细胞的侵袭

3.7 NAC能够抑制神经胶质瘤在体内的生长

讨论

参考文献

结论

综述:Notch信号通路与肿瘤的研究现状

参考文献

附录

研究生期间的文章发表情况

致谢

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