GABAB受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节/脊髓背角核因子κB通路的调控作用

摘要

目的：
　　紫杉醇作为临床一线抗肿瘤药物，对各种恶性肿瘤均有显著疗效，但其在使用过程中表现出一种呈剂量依赖的神经毒性，即紫杉醇诱发的外周神经病理性疼痛，降低患者生活质量，尚无有效治疗手段，制约着紫杉醇在肿瘤病人治疗中的应用。阐明其发病机制有十分重要的临床意义和价值。
　　本实验通过腹腔注射紫杉醇制备大鼠紫杉醇诱发神经痛模型，鞘内注射γ-氨基丁酸B（GABAB）受体激动剂巴氯芬、拮抗剂Saclofen及核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂SN50，观察GABAB受体在紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节（dorsal root ganglia, DRG）/脊髓背角NF-κB通路的调控作用。
　　方法：
　　自河北医科大学动物实验中心购买清洁级健康雄性SD大鼠（160~180 g），腹腔注射紫杉醇制备大鼠紫杉醇诱发神经痛模型，取模型制备成功的40只，采用随机数字表法，根据鞘内给药不同分为4组（n=10）：紫杉醇组（P组）：生理盐水10μl；巴氯芬（Baclofen）组（B组）：Baclofen0.5μg/10μl；Saclofen组（S组）:Saclofen30μg/10μl；SN50组（SN组）：SN50200 ng/10μl。另取10只同周龄大鼠腹腔注射等体积溶剂并鞘内注射生理盐水10μl作为对照组(C组）。5组大鼠分别于腹腔给药前1 d（T1）、鞘内给药前1 d（T2）、鞘内给药后2 h(T3)测定大鼠50％机械缩足阈值（PWT)，T3时点完成PWT测定后快速取出DRG和脊髓背角，采用分子生物学方法测定GABAB1受体、NF-κBp65及炎性因子白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达变化。
　　结果：
　　1与T1时点比较，除C组外其余各组T2时点的PWT均降低(P＜0.05）；与T2比较，T3时点 B组和SN组PWT升高，而S组PWT降低（P＜0.05）。
　　2 PT-PCR结果：与C组比较，P组脊髓背角GABAB1受体mRNA表达下调，而DRG中GABAB1受体mRNA表达上调（P＜0.05）；与C组比较，P组脊髓背角和DRG中NF-κBp65、IL-1β和TNFαmRNA均表达上调（P＜0.05）。与P组比较，B组脊髓背角和DRG中GABAB1受体mRNA均表达上调，而NF-κBp65、IL-1β及TNFαmRNA表达下调（P＜0.05）；S组和B组GABAB1受体及上述因子表达则正好相反，SN组脊髓背角和DRG中，随着NF-κBp65、IL-1β及TNFαmRNA表达下调， GABAB1受体mRNA表达也下调（P＜0.05）。
　　3 Western-blot结果：与C组比较，P组脊髓背角GABAB1受体蛋白表达下调，而DRG中GABAB1受体蛋白表达上调（P＜0.05）；与C组比较，P组脊髓背角和DRG中NF-κBp65、IL-1β和TNFα蛋白均表达上调（P＜0.05）。与P组比较，B组脊髓背角和DRG中GABAB1受体蛋白均表达上调，而NF-κBp65、IL-1β及TNFα蛋白表达下调（P＜0.05）；S组和B组GABAB1受体及上述因子表达则正好相反，SN组脊髓背角和DRG中，随着NF-κBp65、IL-1β及TNFα蛋白表达下调，GABAB1受体蛋白表达也下调（P＜0.05）。
　　结论：
　　紫杉醇诱发神经痛大鼠DRG和脊髓背角中GABAB受体通过调控NF-κB通路的表达变化，在神经痛的发生发展中发挥作用。

目录

声明

前言

材料与方法

1 主要试剂与设备

2 紫杉醇诱发大鼠神经痛模型制备

3 50%缩足反应阈值（PWT）测定

4 动物的选择与分组

5 鞘内置管方法

6 观察指标

7 标本取材

8 实验方法

9 统计学方法

结果

1 5组大鼠不同时点PWT变化

2 RT-PCR实验

3 Western blot实验

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:细胞外信号调节激酶在紫杉醇诱发神经痛中的作用机制

致谢

个人简历