中药方剂配伍机理的中药有效成分逆转4NQO诱导小鼠食管癌前病变的研究

摘要

目的:
　　建立化学致癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide，4NQO)诱导C57BL/6小鼠食管癌前病变动物模型，观察连翘脂素、天花粉蛋白、香加皮三萜类化合物和党参糖蛋白组成的方剂（简称“连花参加”方）在各个阶段对食管癌前病变的逆转作用。探讨“连花参加”方逆转食管癌前病变的作用机制。
　　方法:
　　1 C57BL/6小鼠，300只雌雄各半。随机分为6组:A1（正常对照组）、A2组（甲基纤维素对照组），每组各30只;B（单纯诱癌组）、C（治疗组）、D（预防治疗组）、E（全反式维甲酸阳性对照组）四组，每组60只。4NQO用灭菌水配制成100μg/ml浓度，通过正常饮用法给予B、C、D、E四组小鼠。受试药是“连花参加”方，其配置比例和方法为连翘脂素∶天花粉蛋白∶香加皮三萜类化合物∶党参糖蛋白按照2mg∶1.4mg∶1.4mg∶0.7mg的比例混合溶于20ml浓度为1.5％的甲基纤维素中制成浓度为6.25％的“连花参加”方使用。D组实验一开始给小鼠进行“连花参加”方灌胃。C组在诱癌第15周后B组小鼠出现不典型增生时给小鼠进行“连花参加”方灌胃，E组在诱癌第15周后与C组同期给小鼠进行“全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)”灌胃。C、D、E组小鼠灌胃，均为0.1ml/次，3次/周。
　　2在实验第12、15周，A1，A2，B，D组每组分别各处死小鼠5只，观察小鼠食管是否出现不典型增生。在第15周，B、C、D、E组四组小鼠统一由100μg/ml浓度4NQO水改为灭菌水。第18、21周的每个时间段，A1、A2每组各处死5只，B、C、D、E每组各处死15只。第24周，处死各组剩余的所有动物。
　　3应用光镜和透射电镜(transmission electron microscope，TEM)观察“连花参加”方对4NQO诱导的小鼠食管癌前病变的逆转作用。通过HE染色光镜观察评估了各给药组与模型组小鼠食管组织的癌前病变程度。通过免疫组化分析研究B7-H4分子在小鼠食管癌前病变进程中的表达水平并考察各给药组与模型组动物B7-H4分子的表达差异，以评价B7-H4在食管癌前病变中发挥的作用。
　　结果:
　　1通过HE染色结果观察到在第18、21、24周C组和D组与B组小鼠同期相比食管病变进程减慢。通过实验我们发现，第18、21周时，B、C、D、E各组之间同期比较无统计学差异，P＞0.05。第24周时，B、C、D、E各组之间比较其食管癌发生率有显著性差异，P＜0.05。第24周时，C、D、E三组分别比B组小鼠食管上皮组织癌变程度降低了，P＜0.05。第24周时，C组和D组，C组和E组，D组和E组，两两比较其小鼠食管癌变程度无明显差异。说明第24周时，“连花参加”方预防或治疗均可减缓食管癌病变的进程，同时“连花参加”方的药效与ATRA的药效相当。
　　2在第21周时，透射电镜观察到A1、A2、C、D、E各组小鼠食管组织细胞超微结构均比B组小鼠食管组织细胞结构连接紧密，细胞之间间隙减少。
　　3在4NQO诱导的小鼠食管癌前病变，轻度不典型增生-中不典型增生-重不典型增生-食管癌的过程中，B7-H4的表达水平有显著差异，P＜0.05。并且随着食管癌前病变程度的加重，B7-H4的表达水平也逐渐增强。提示B7-H4分子可能在食管癌进展中发挥着重要作用。
　　4在第18、21周时，B、C、D、E各组间小鼠食管组织中B7-H4表达水平无统计学差异，P＞0.05;在第24周时，B、C、D、E各组间小鼠食管组织中B7-H4表达水平有显著差异，P＜0.05。说明第24周时，“连花参加”方预防或治疗组B7-H4表达均与单纯诱癌组B7-H4表达水平不相同。
　　结论:
　　14NQO成功诱导了小鼠食管癌前病变动物模型。
　　2“连花参加”方预防治疗可减缓食管癌前病变的发展进程。
　　3 B7-H4分子可能在食管癌进展中发挥着重要作用。
　　4“连花参加”方的疗效可能是通过抑制小鼠食管组织B7-H4的表达而影响4NQO诱导的小鼠食管癌前病变的形成。

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结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 共刺激分子B7-H4与肿瘤免疫

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