多沙唑嗪手性及非手性液相分析方法的建立和应用研究

摘要

多沙唑嗪(doxazosin，Dox)为喹唑啉环衍生物，属长效、高选择性α1受体阻断药，其分子结构中存在一个手性碳原子，为手性药物，临床使用其消旋体[（±）Dox]，是治疗良性前列腺增生合并下尿路症状(BPH/LUTS)的一线用药，也是治疗高血压的常用添加药物(add-ondrugs)。
　　众所周知，药物的效应与血药浓度密切相关，因此分析和了解体内（±）Dox的血药浓度变化，对（±）Dox治疗BPH及高血压时的临床疗效和不良反应十分必要。本文建立了大鼠血浆中消旋多沙唑嗪浓度的非手性液相分析测定方法，并将该方法用于研究大鼠口服与静脉注射消旋多沙唑嗪后的药代动力学。
　　多沙唑嗪为手性药物，而通常手性药物的体内处置过程存在立体选择性。这是由于生物体内广泛存在具有手性识别能力的生物大分子，当手性药物与其相互作用时将产生立体选择性，从而体现不同的药代动力学和药效学特征。因此，分析多沙唑嗪对映体的体内过程特别是血药浓度变化，对进一步研究两对映体的血药浓度与临床疗效的关系十分重要。本文用卵粘蛋白手性柱建立了大鼠血浆中多沙唑嗪对映体的手性高效液相色谱分析测定方法，并用该方法研究了多沙唑嗪对映体在体内及体外的手性转化情况。
　　第一部分多沙唑嗪非手性高效液相色谱分析方法的建立
　　目的:建立消旋多沙唑嗪的非手性高效液相色谱荧光检测方法。
　　方法:优化消旋多沙唑嗪的荧光检测波长，选定哌唑嗪作为内标物质，考察不同流动相组成、流速、缓冲盐溶液浓度及pH对分离效果的影响。
　　结果:确定了高效液相荧光色谱法的色谱条件:色谱柱为Agilent C18柱，柱温30℃，流动相为buffer-甲醇(44∶56，v/v; buffer:30mmol·L-1的磷酸盐缓冲液，pH3.1)，流速为1.0 mL·min-1，激发波长255nm，发射波长385 nm，内标物为哌唑嗪。
　　结论:该方法获得的色谱图基线平稳，内标哌唑嗪与多沙唑嗪达到基线分离，二者峰形良好。
　　第二部分大鼠口服与静脉注射消旋多沙唑嗪后的药动学研究
　　目的:建立大鼠血浆中消旋多沙唑嗪浓度的高效液相色谱荧光检测方法，并用该方法研究大鼠口服与静脉注射消旋多沙唑嗪后的药代动力学。
　　方法:取SD(Sprague-Dawley)大鼠14只，随机分为两组，分别口服和尾静脉注射消旋多沙唑嗪溶液，剂量为6 mg·kg-1。液液萃取法进行血浆样品预处理，所选萃取液为正己烷及乙酸乙酯(1∶1)混合液。高效液相荧光色谱法的色谱条件:色谱柱为Agilent C18，柱温30℃，流动相为buffer-甲醇(44∶56，v/v; buffer:30 mmol·L-1的磷酸盐缓冲液，pH3.1)，流速为1.0 mL·min-1，荧光检测激发波长255 nm，发射波长385 nm，内标物为哌唑嗪。用WinNonlin软件计算口服和静脉注射给药后的药动学参数，并算出大鼠口服消旋多沙唑嗪的生物利用度。
　　结果:消旋多沙唑嗪检测浓度在4-4000 ng·mL-1范围内线性关系良好，消旋多沙唑嗪平均回收率为101.8％，RSD为5.7％。口服给药后，血浆中消旋多沙唑嗪的t1/2为（2.19±0.35）h，AUC为（1939.14±0.19）h·ng·mL-1;静脉注射给药后，血浆中消旋多沙唑嗪的t1/2为（1.41±0.15）h，AUC为(4271.80±0.09) h·ng·mL-1。
　　结论:该分析方法选择性强、准确度高、重现性好，适用于消旋多沙唑嗪在大鼠血浆中的分析测定。依据口服与静脉注射给药得出的药动学参数，算得大鼠口服消旋多沙唑嗪的生物利用度为45.4％。
　　第三部分多沙唑嗪手性高效液相色谱分析方法的建立
　　目的:建立多沙唑嗪对映体的手性高效液相色谱荧光测定方法。
　　方法:考察流动相pH及流速、有机改性剂种类对多沙唑嗪对映体分离度的影响。
　　结果:确定了多沙唑嗪对映体的手性分离色谱条件:色谱柱为卵黏蛋白手性柱，柱温30℃;荧光检测激发波长和发射波长分别为255 nm、385nm;流动相为buffer-乙腈（85∶15，v/v; buffer:20mmol·L-1的磷酸盐缓冲液，pH5.3），流速0.8 mL·min-1。
　　结论:利用卵粘蛋白手性柱建立了消旋多沙唑嗪的手性高效液相色谱分析方法，消旋多沙唑嗪两个对映体在11 min内出峰完全，峰形良好且达到了基线分离。
　　第四部分多沙唑嗪对映体在大鼠血浆中的测定及手性转化研究
　　目的:建立大鼠血浆中多沙唑嗪对映体的高效液相色谱荧光测定方法，并研究多沙唑嗪对映体在体内和体外的手性转化情况。
　　方法:液液萃取法进行血浆样品预处理，所选萃取液为正己烷及乙酸乙酯(1∶1)混合液。色谱条件:卵黏蛋白手性色谱柱，柱温30℃;荧光检测激发波长和发射波长分别为255 nm、385 nm;流动相为buffer-乙腈（85∶15，v/v; buffer:20 mmol·L-1的磷酸盐缓冲液，pH5.3），流速0.8 mL·min-1;内标为哌唑嗪。体外研究:将分别加入左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪的大鼠血浆于37℃水浴温育2天、5天、10天后测定;体内研究:SD大鼠分别连续口服左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪溶液1个月，于最后一次给药8h后腹主动脉取血测定。
　　结果:多沙唑嗪两种对映体检测浓度在4-2000 ng·mL-1范围内线性关系良好，左旋多沙唑嗪平均回收率为99.5％，RSD为3.6％;右旋多沙唑嗪平均回收率为99.3％，RSD为4.3％。多沙唑嗪对映体与大鼠血浆的体外共同温育实验中，未观察到转化现象;大鼠连续口服左旋或右旋多沙唑嗪1个月，血浆中也未观察到手性转化现象。
　　结论:该分析方法选择性强、准确度高、重现性好，适用于多沙唑嗪对映体在大鼠血浆中的测定研究。体内、体外研究表明多沙唑嗪对映体不易发生相互转化。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 多沙唑嗪非手性高效液相色谱分析方法的建立

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第二部分 大鼠口服与静脉注射消旋多沙唑嗪后的药动学研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 多沙唑嗪手性高效液相色谱分析方法的建立

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第四部分 多沙唑嗪对映体在大鼠血浆中的测定及手性转化研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

综述 传统药物对西药药代动力学影响的研究与探索

致谢

个人简历