长链非编码RNA CRNDE在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义的研究

摘要

目的：脑胶质瘤是多种因素和多类基因相互作用后逐步发展的结果，但它具体的发生和发展机制仍是一个谜团。长链非编码RNA（LncRNA）是构成人类基因组中重要的组成部分，虽然其序列上缺乏开放读码框(OFR)，不能直接表达蛋白，但它在转录前后以及表观遗传学等多个环节对靶基因进行精准的调控。他通过间接干预基因的表达从而影响到整个生物学的功能。大量研究分析表明，LncRNA的异常表达与人类肿瘤的发生、演变有着紧密的关联，而且与肿瘤恶性分化程度以及预后相关。CRNDE是结肠癌差异表达长链非编码RNA，此基因存在于人染色体的反义链上，全长约10kb，具有5个核心外显子和一个附加外显子。它在宫颈癌和直肠癌组织中的表达均明显高于癌旁组织。这种表达差异在脑胶质瘤中是否成立呢？本实验围绕脑胶质瘤组织与瘤旁组织，有关CRDNE表达水平是否存在差异以及CRNDE与肿瘤临床病理学的关联展开研究，通过对两组病人进行长期随访后，获取他们的生存时间并纳入生存分析。其结果可以为脑胶质瘤病的诊断、治疗及预后评估开辟一条新的道路。
　　方法：
　　1.收集自2007年至2012年，河北医科大学第二医院手术室，神经外科手术当中取出的胶质瘤标本。经过我们仔细的核查后确认,全部的患者均未曾在术前接受过放射治疗及化学药物治疗。留取进行实验的组织均由病理科鉴定，存储在冻存管内并及时将管放入液氮罐内保存。所收集的80例脑胶质瘤标本参照2007世界卫生组织对中枢神经系统（WHO-CNS）肿瘤的分类标准，其中低级别组42例，高级别组38例。此外，在脑胶质瘤手术当中，收集20例手术入路中显微镜下距瘤组织边缘1cm以内的正常脑组织标本（使用术中导航确定肿瘤边界）作为对照组，收集方法与收集胶质瘤组织一致。
　　2.使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）方法，获取瘤旁组织与脑胶质瘤组织的CRNDE表达量，并对两者进行比较。采用卡方检验验证CRNDE表达水平与临床病理特征的关系。经过长期随访，获得脑胶质瘤病人的生存时间，采用 Kapaln-Meier生存分析，绘制两组患者的生存曲线并对两条曲线进行比较，生存时间从患者手术之日算起，到其死亡或者是末次随访日所经历的时间，单位按月来计数。探索CRNDE表达水平的高低与患者五年生存率的关系。
　　结果：
　　1.对比脑胶质瘤组织与瘤旁组织的CRNDE表达水平，脑胶质瘤组织中CRNDE的最后Ct均值为3.89±0.19，瘤旁组织CRNDE的最后Ct的均值为1.00±0.04，因此可以看出，CRNDE在脑胶质瘤的表达水平明显高于瘤旁组织CRNDE的表达水平。对比高级别脑胶质瘤CRNDE的表达水平与低级别组 CRNDE的表达水平，可发现高级别肿瘤 CRNDE的最后 Ct的均值为4.33±0.40，低级别脑胶质瘤CRNDE的最后Ct均值为1.87±0.18，由此可知，高级别脑胶质瘤组织当中CRNDE的表达水平明显高于低级别组。（见图1、图2、表1、表2）
　　2.对CRNDE的表达水平与患者年龄、性别、发病形式、肿瘤大小、是否存在坏死、WHO级别、肿瘤的复发，多种临床因素进行比较，使用卡方检验进行分析后表明，CRNDE的表达与肿瘤的复发（P=0.010）、肿瘤的大小（P=0.026）、WHO分级（P=0.003）有关，与年龄（P=0.358）、性别（P=0.204）、发病形式（P=0.171）、是否存在坏死（P=0.367）无关。（见表3）
　　3.本组资料中，我们根据CRNDE表达量选取中位表达量来划分高表达组和低表达组。使用 Kaplan-Meier进行生存分析显示，高表达组患者的生存时间较低表达组患者明显缩短。比较两者的一年生存率显示：高表达组患者一年生存率为84.4％，低表达组患者一年生存率为97.1％，两者比较有显著差异（P<0.05）。比较两组患者五年生存率，发现CRNDE高表达组的脑胶质瘤患者五年生存率仅为15.6％，低表达组患者五年的生存率为37.1％。两者比较有显著差异（P<0.05）。（见图3）
　　结论：
　　1.在脑胶质瘤组织与瘤旁组织有关CRNDE表达水平的对比中，以及高级别的脑胶质瘤与低级别的脑胶质瘤关于CRNDE表达水平的比较中，我们可以发现 CRNDE在脑胶质瘤组织中的表达明显高于瘤旁组织中的表达，且 CRNDE的表达水平与 WHO分级有关，高级别的脑胶质瘤CRNDE表达水平明显高于低级组。
　　2.脑胶质瘤中CRNDE表达水平与肿瘤的大小、WHO分级以及肿瘤是否复发有关，与年龄、性别、发病形式、是否存在坏死因素无关。
　　3.脑胶质瘤中CRNDE表达水平越高，往往相同时间内其患者生存率越低，且CRNDE高表达组的患者五年生存率明显小于低表达组。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

附图

附表

讨论

1 脑胶质瘤临床特点

2 LncRNA与CRNDE在脑胶质瘤中的具体作用。

3 有关CRNDE基因的研究成果。

结论

参考文献

综述:长链非编码RNA CRNDE在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义的研究

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