白藜芦醇逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药机制的研究

摘要

第一部分白藜芦醇逆转HL-60/ADR细胞耐药的PI3K/Akt/Nrf2信号通路机制
　　目的：
　　探讨急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药及白藜芦醇逆转其耐药的PI3K/Akt/Nrf2信号通路机制。
　　方法：
　　1实验分为5组：①HL-60细胞未处理组(HL-60)；②HL-60/ADR耐药细胞未处理组(HL-60/ADR)；③HL-60/ADR耐药细胞经阿霉素处理组(ADR)；④HL-60/ADR耐药细胞经白藜芦醇处理组(Res)；⑤HL-60/ADR耐药细胞经阿霉素和白藜芦醇联合处理组(ADR+Res)。
　　2采用CCK-8法测定不同浓度Res(25、50、100、200μmol/L)和不同浓度ADR(2、4、8、16μmol/L)以及Res(25μmol/L)联合不同浓度ADR(2、4、8、16μmol/L)对HL-60/ADR耐药细胞增殖抑制率的影响。
　　3采用流式细胞术检测2μmol/L ADR和2μmol/L ADR+25μmol/L Res处理48h后HL-60/ADR耐药细胞内ADR的自发荧光强度。
　　4采用RT-PCR法检测各实验组中信号分子PI3K、Akt、Nrf2和耐药蛋白MRP1的mRNA表达水平。
　　5采用Western-blot法检测各实验组中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、Nrf2和MRP1的蛋白表达水平。
　　结果：
　　1不同浓度Res(25、50、100、200μmol/L)作用于HL-60/ADR耐药细胞48h后，细胞的最大增殖抑制率分别为44％、61%、76%和81%，呈浓度依赖性(r=0.876, P<0.05)；ADR对HL-60敏感细胞和HL-60/ADR耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为：(0.147±0.015)μmol/L和(8.486±1.133)μmol/L；与ADR组的半数抑制浓度(IC50)(8.486±1.133μmol/L)相比， ADR+25μmol/L Res组HL-60/ADR耐药细胞的IC50(1.869±0.239μmol/L)明显减少(P<0.05)。
　　22μmol/L ADR联合25μmol/L Res作用48h后，HL-60/ADR耐药细胞内 ADR自发荧光强度(3953±50)较2μmol/L ADR处理组(1850±122)明显增加(P<0.05)。
　　3 HL-60/ADR耐药细胞内PI3K、Akt、Nrf2和MRP1的mRNA表达水平显著高于HL-60敏感细胞(P<0.05)；25μmol/L Res和2μmol/L ADR+25μmol/L Res处理48h后，HL-60/ADR耐药细胞内PI3K、Akt、Nrf2和MRP1的mRNA表达水平均显著下调(P<0.05)。
　　4 HL-60/ADR耐药细胞内PI3K、p-Akt、Nrf2和MRP1的蛋白表达水平显著高于HL-60敏感细胞(P<0.05)；25μmol/L Res和2μmol/L ADR+25μmol/L Res处理48h后，HL-60/ADR耐药细胞内PI3K、p-Akt、Nrf2和MRP1的蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。
　　第二部分白藜芦醇逆转HL-60/ADR细胞耐药的凋亡机制
　　目的：
　　探讨急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药及白藜芦醇逆转其耐药的凋亡机制。
　　方法：
　　1实验分为5组：①HL-60细胞未处理组(HL-60)；②HL-60/ADR耐药细胞未处理组(HL-60/ADR)；③HL-60/ADR耐药细胞经阿霉素处理组(ADR)；④HL-60/ADR耐药细胞经白藜芦醇处理组(Res)；⑤HL-60/ADR耐药细胞经阿霉素和白藜芦醇联合处理组(ADR+Res)。
　　2采用流式细胞术检测ADR、Res和ADR+Res处理HL-60/ADR耐药细胞48h后的细胞凋亡率。
　　3采用 RT-PCR法检测各实验组中抗凋亡蛋白 Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的mRNA表达水平。
　　4采用Western-blot法检测各实验组中Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。
　　结果：
　　1 Res和ADR+Res处理48h后，HL-60/ADR耐药细胞凋亡率分别为(33.9±3.6)%和(31.1±2.7)%，较 HL-60/ADR组(4.4±0.7)%均显著增高(P<0.05)。
　　2 HL-60/ADR耐药细胞内Bcl-2的mRNA表达水平显著高于HL-60敏感细胞，Bax的mRNA表达水平显著低于HL-60敏感细胞(P<0.05)；Res和ADR+Res处理48h后，HL-60/ADR耐药细胞内Bcl-2的mRNA表达水平明显下调(P<0.05)，Bax的mRNA表达水平明显上调(P<0.05)。
　　3 HL-60/ADR耐药细胞内Bcl-2的蛋白表达水平显著高于HL-60敏感细胞，Bax的蛋白表达水平显著低于HL-60敏感细胞(P<0.05)；Res和ADR+Res处理48h后，HL-60/ADR耐药细胞内Bcl-2的蛋白表达水平明显下调(P<0.05)，Bax的蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。
　　结论：
　　白藜芦醇可逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药，可能是通过抑制耐药蛋白 MRP1，促进耐药细胞凋亡发挥作用，此作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

目录

声明

英文缩写

引言

第一部分白藜芦醇逆转HL-60/ADR细胞耐药的PI3K/Akt/Nrf2信号通路机制

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分白藜芦醇逆转HL-60/ADR细胞耐药的凋亡机制

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述:白藜芦醇逆转肿瘤耐药的分子机制研究进展

致谢

个人简历