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Keywords: Skeletal muscle injury,Macrophages,Regen
TaqDNA聚合酶试剂盒购于Promega公司，PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。T
1.2实验动物
MCK-cre转基因小鼠（B6.FBV（129S4）-Tg（Ckmm-cre）5khn/J）购于Ja
2方法
1.0g苏木素+10ml纯酒精，20g硫酸铝钾+200ml蒸馏水，红色氧化汞0.5g，首先将苏木素溶
伊红溶液
0.5g水溶性伊红+100ml蒸馏水
0.1M PBS（PH7.3）
Gomori三色液
0.6g变色素2R+ 0.3g坚牢绿FCF+0.6g 磷钨酸+ 1.0ml冰醋酸+蒸馏水100ml，
Tris缓冲液
1.3.2荧光染色所需液体配制
实验动物经10%水合氯醛腹腔麻醉，取小鼠胫骨前肌。取材的新鲜肌肉标本用生理盐水浸湿的无菌纱布包裹，立
肌肉标本快速处理与保存的程序为：
①新鲜取材肌肉标本，剔除神经、血管、筋膜等组织，将所取肌肉两端切除，留取中间段备用；
②将黄耆胶用自来水调成可塑性面团状，放置至少30分钟后使用，并将黄耆胶置于准备好的圆形木托上，堆成金
③将标本包埋于金字塔形的黄耆胶内，肌纤维横切面向上，标本周围用黄耆胶修饰平滑，保持标本至少有1/2以
④将异戊烷倒入小烧杯中，将小烧杯缓慢放入装有液氮的保温瓶内预冷，搅动异戊烷，直至不再有白色冰雾溢出，
⑤将载有组织块的木托置入异戊烷内，快速搅动数秒（约30s），拿出后置于装有液氮的保温瓶中暂存；
⑥将暂存于液氮中的组织标本送至-80℃超低温冰箱内冷冻保存直至使用；
⑦使用时用盛有液氮的保温瓶将标本取出，置于冰冻切片机内，设置温度在-22℃左右，复温30分钟左右。设
MGT染色：苏木精（过滤）染色10分钟→流水冲洗10分钟→Gomori染液30分钟→脱水透明→封片。
NADH染色：NADH 8mg+硝基四唑蓝100mg+Tris盐酸液10ml（过滤）→37℃水浴箱内
NSE染色：0.1%PBS10ml+1%萘酚醋酸盐丙酮液0.25ml混匀待用，4%付品红溶液0.4m
将肌肉组织进行冰冻切片后，贴于粘附载玻片上，在空气中晾干15分钟，切片入Bouin液，于室温作用一晚
①常温下风干15分钟，标圈；
②PBS洗5分钟×3次；
③10%马血清封闭45分钟~1小时后吸除多余液体；
④PBS冲洗分钟×3次；
⑤PBS按相应比例稀释一抗，滴加一抗，4℃过夜；
稀释比例：hIGF-1 1：20；CD68 1:100；
⑥室温下复温30分钟-45分钟；
⑦PBS洗5分钟×3次；
⑧PBS配Hochest 1:100；染30分钟；
⑨PBS配FITC二抗 1:100；滴加二抗，室温，45分钟；
⑩PBS洗5分钟×3次；封片观察。
每组4只小鼠，每只小鼠每一肌肉组织用软件拼出完整肌肉横截面图（100×下拍摄），用于坏死和再生区域的
一、一般情况
二、个人经历
