药用石斛内生真菌的分离鉴定及活性成分初步研究

摘要

内生真菌是指那些在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。近年来的研究表明，内生真菌可以产生与宿主相同或相似的代谢产物，对相应的内生真菌及其代谢产物的研究已经成为寻找药物来源的一种新途经。 本文以名贵药用植物--石斛(DendrobiumSW.)为实验材料，从8种石斛的根、茎、叶中分离得到92株内生真菌，经过筛选，在流苏石斛茎、长苏石斛叶中得到两株炭角菌，分别编号为LSJ1和CSY1，并诱导两株菌产生有性繁殖结构；采用形态学和分子生物学结合的方法对其进行鉴定，鉴定结果显示两株菌均为Xylariavenosula；并测定了这两株菌的发酵终点、胞内及胞外多糖含量、胞内及胞外水溶性蛋白含量、抑菌活性等。 β-谷甾醇是流苏石斛的重要活性成分，对12株流苏石斛内生真菌进行PD液体发酵培养，采用高效液相色谱(HPLC)法从其中三株菌(LSJ1、LSJ5、LSY4)的菌丝体中检测出β-谷甾醇，含量依次为：7.94ug／g，0.274ug／g，11.51ug／g；采用形态学和分子生物学结合的方法对这三株菌进行鉴定，鉴定结果显示LSJ1为：Xylaravenosula，LSJ5属于Yalsaceae，LSY4为：Colletotrichumgloeosporioides· 对多年生(金钗)石斛总DNA的提取方法进行了优化，改进了提取液配方，提高了CTAB的浓度(2.5％)和NaCl浓度(1.4mol·L-1)，并在酚氯仿抽提后的水相中加入0.5倍体积的高浓度NaCl(5mol／L)除多糖，然后再加2体积的无水乙醇沉淀DNA，收到较好效果。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

1.内生真菌研究概况

1.1药用植物的内生真菌

1.2.药用真菌

2.石斛及其内生真菌

2.1石斛内生真菌的研究概况

2.2药用石斛的研究现状

3.本文的研究内容，目的及意义

第二章石斛内生炭角菌的分离鉴定及活性成分初步研究

1材料

1.1样品来源

1.2仪器和试剂

1.3培养基的配制

2.方法

2.1菌株的分离与筛选

2.2内生炭角菌的形态学鉴定

2.3内生炭角菌的分子生物学鉴定

2.4内生炭角菌活性成分研究

3结果与分析

3.1石斛内生真菌分离结果

3.2内生炭角菌的筛选结果

3.3子实体的产生及鉴定

3.4分子生物学鉴定结果

3.5内生炭角菌活性成分初步测定

4小结与讨论

第三章产β－谷甾醇的流苏石斛内生真菌的分离鉴定

1材料

1.1材料来源

1.2主要仪器设备

1.3试剂

2方法

2.1标准溶液的配制

2.2实验材料的培养及预处理

2.3色谱分析条件

2.4产β－谷甾醇内生真菌的鉴定

3结果与分析

3.1 β－谷甾醇的定性与定量

3.2样品的HPLC检测图谱与分析

3.3产β－谷甾醇的流苏石斛内生真菌的鉴定

4小结与讨论

第四章多年生(金钗)石斛基因组提取方法的优化

1材料

1.1样品来源

1.2仪器及试剂

2方法

2.1提取流程的优化

2.2DNA纯度及含量的检测

2.3RAPD-PCR检测

3结果与分析

3.1 DNA定量

3.2琼脂糖凝胶电泳结果

3.3RAPD-PCR结果

4小结与讨论

致谢

参考文献

附录：在读期间发表的文章

图版