免疫球蛋白对实验性癫痫大鼠GFAP及IgG影响与机制的研究

摘要

目的： 癫痫(Epilepsy)是小儿中枢神经系统常见疾病之一，临床表现为突然短暂发作的脑功能异常，发病机制复杂、类型多样、治疗困难。 国内外研究证明癫痫与免疫有密切的关系，不少学者临床上应用静脉注射用人免疫球蛋白(Human Intravenous Immunoglobulin，IVIG)治疗癫痫，结果发现IVIG对癫痫治疗有效，但其治疗癫痫的机制目前仍不清楚，且相关研究多基于临床观察，动物实验研究报道较少。 本研究拟在腹腔注射印防已毒(Picrotoxin，PTX)建立癫痫动物模型的基础上，研究免疫球蛋白对癫痫的预防与治疗作用，探讨其治疗癫痫的机制，为临床应用免疫调节治疗癫痫提供理论依据。 方法： 向56只Wistar大鼠腹腔注射PTX(1.5mg/kg)以建立癫痫动物模型。随机分为七组(n=8)：IVIG治疗组(A1组)注射PTX1.5mg/kg.d，连续21天(d1～d21，以下剂量同)，实验第22天(d22)始于尾静脉注射IVIG500mg/kg.d，连用4天(d22～d25，以下剂量同)。NS治疗对照组(A2组)以同等体积NS代替IVIG，余同A1组。IVIG预处理组(B1组)注射IVIG4天(d—4～d-1)，实验第5天起注射PTX21天(d1～d21)。NS预处理对照组(B2组)以同等体积NS代替IVIG，余同B1组。IVIG治疗对照组(C1组)以同等体积NS代替PTX，余同A1组。IVIG预处理对照组(C2组)以同等体积NS代替PTX，余同B1组。空白对照组(C3组)以同等体积NS代替PTX，连续25天。每日对大鼠进行防卫反应及惊厥强度评估，A1组、A2组、C1组在实验第22天(d22)及第26天(d26)，B1组、B2、C2组在实验第5天(d1)及第26天(d22)，C3组在实验第1天(d1)及第26天(d26)取癫痫大鼠外周血采用流式细胞检测术法检测T细胞亚群、B细胞分子的表达，并采用免疫组织化学法检测其海马脑组织的组织病理学变化、神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)及IgG免疫反应阳性(IgG—IR)细胞水平变化。 结果： 1.大鼠腹腔注射PTX癫痫动物模型的建立IVIG治疗组(A1组)、NS治疗对照组(A2组)、NS预处理对照组(B2组)在实验第9～12天(d5～d8,即第5～8次予PTX，下同)开始出现神经系统症状，表现为不同程度的肢体阵挛抽搐，并伴有防卫反应增强，实验第14～21天A1、A2组(d14～d21)，实验第18～25天B2组(d14～d21)癫痫发作达高峰，实验第23～25天(d23～d25) A1组趋向缓解；IVIG预处理组(B1组)在实验第14～16天(d10～d12)出现临床症状，第20～21天(d16～d17)临床症状达高峰，第22～25天(d18～d21)趋向缓解。与C3组比较，PTX造模各组(A1、A2、B1、B2组)防卫反应及惊厥强度评级明显升高(P＜0.05)，脑组织内双侧海马神经元受到损害，尤以CA1、CA3区明显，外周血B细胞比例明显升高，CD3+T细胞及CD4+T细胞比例明显降低，脑组织内GFAP、IgG—IR细胞表达水平明显升高(以上比较均为P＜0.05)。 2.IVIG对癫痫的预防作用与IVIG预处理对照组(B2组)比较，IVIG预处理组(B1组)临床症状明显减轻，防卫反应及惊厥强度评级明显降低(P＜0.05)，发作程度减轻，发作时间延迟，病程缩短，组织病理学检查显示双侧海马神经元损害明显减轻，B细胞比例明显降低，CD3+T细胞及CD4+T细胞比例明显升高，脑组织内GFAP、IgG—IR细胞表达水平明显降低(以上比较均为P＜0.05)。 3.IVIG对癫痫的治疗作用与IVIG治疗对照组(A2组)比较，IVIG治疗组(A1组)的整个病程长度无明显差异(P>0.05)，而防卫反应及惊厥强度评级有降低趋势，组织病理学检查显示双侧海马神经元损害减轻，B细胞比例明显降低，CD3+T细胞及CD4+T细胞比例明显升高，GFAP、IgG-IR细胞表达水平明显降低(以上比较均有P<0.05)。与IVIG预处理组(B1组)比较，IVIG治疗组(A1组)防卫反应及惊厥强度评级有降低趋势，而组织病理学检查显示双侧海马神经元损害减轻程度较小，B细胞下调幅度、CD3+T细胞及CD4+T细胞上调幅度较低，脑组织内GFAP、IgG-IR细胞下调水平较低(以上比较均有P<0.05)。 4.IVIG对正常(无免疫紊乱)大鼠的影响 IVIG治疗对照组(C1组)、IVIG预处理对照组(C2组)与空白对照组(C3组)比较：组织病理学检查、GFAP、IgG-IR细胞水平三组两两比较无明显差异(P>0.05)。B细胞数量、CD3+T细胞及CD4+T细胞数量三组两两比较无明显差异(P>0.05)。 结论： 1、免疫球蛋白预处理可延缓癫痫的发作潜伏期，并减轻其发作强度。 2、免疫球蛋白预处理及治疗可下调癫痫大鼠外周血B细胞及脑组织内IgG的表达，上调外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞的表达，缓解脑组织免疫紊乱继而减轻神经元损伤。 3、免疫球蛋白预处理及治疗能降低癫痫大鼠脑内GFAP的表达水平，抑制星型胶质细胞增生，减少胶质瘢痕形成，从而缓解癫痫发作。 4、免疫球蛋白本身对正常(无免疫紊乱)大鼠的外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞及B细胞数量无明显影响，对其脑组织内病理结构、GFAP、IgG-IR细胞水平表达无明显影响。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写对照表

声明

第1章前言

第2章材料和方法

第3章实验结果

第4章讨论

结论

参考文献

附图

致谢