鼻咽癌高发区EB病毒环境激活物的流行病学研究及CYP1A1基因与鼻咽癌易感性的关联分析

摘要

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)在世界大部分地区为罕见肿瘤，但在中国南方部分省市和亚洲东南部一些国家发病率却很高，其中我国南方的广东省是世界最高发地区，世界人口标化发病率高达男性约30/10万，女性约13/10万。众多证据均表明，鼻咽癌的发病机制遵循遗传—环境—EB病毒三大因素的交互作用。EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)感染和环境因素是鼻咽癌的重要病因。有研究表明在鼻咽癌高发地区EBV阳性的健康成年人发展为鼻咽癌的风险较高。此外，也有证据表明EBV的再激活伴随着鼻咽癌的发生、发展全过程。广东咸鱼是鼻咽癌高发区某些地区人们从儿童时期就开始食用的常见食物之一。早在1988年就有研究发现广东咸鱼提取物对Raji细胞EBV有激活作用。另外，大戟属植物是高发区常用的汤料之一，曾毅教授等发现中国传统中草药和大戟科植物土壤中的提取物中含有激活Raji细胞EBV早期抗原的物质。这些发现均提示人们日常生活所接触的一些环境物质或者食物中存在可以诱导EBV再激活的物质，这些环境因素暴露量的差异也许是导致血清中EBV水平差异，进而引起鼻咽癌发病差异的主要因素之一。但是，目前尚无来自流行病学的证据支持广东咸鱼或中草药等对EBV存在再激活作用。大量的研究表明吸烟、饮酒、食用腌制食品、传统中草药等都和鼻咽癌的发病风险升高有关，但是具体机制并不清楚。这些环境因素对EBV的再激活是否有作用目前也尚不清楚。在论文第一部分，我们通过在鼻咽癌高发区——广东省开展大规模的流行病学调查筛查可能的EBV环境激活物。另外，移民流行病学研究证据和复合分离分析研究结果均提示遗传因素在鼻咽癌的发生发展中具有重要作用。细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP)是体内代谢活化亚硝酸盐等致癌物质的重要代谢酶。作为CYP450超家族的亚家族之一，CYP1A1遗传多态性与头颈肿瘤、肺癌、乳腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤易感性相关，是烟草前致癌物如多环芳烃和芳香烃类等的主要代谢活化酶，可以将各种前致癌物质转化为具有致癌能力的活性中间产物。因此，在论文第二部分，我们以广东鼻咽癌核心家系为研究对象，利用以家系为基础的关联研究探讨基因CYP1A1上m1位点和m2位点与鼻咽癌易感性的关系。
　　 第一部分：鼻咽癌高发区EB病毒环境激活物的流行病学研究。
　　 目的：有研究发现在鼻咽癌高发区EBV阳性的健康成年人发展为鼻咽癌的风险较高。此外，也有证据表明EBV的再激活伴随着鼻咽癌的发生、发展全过程。为了筛查EBV的环境激活物从而为高发区鼻咽癌的一级预防提供直接线索，我们在广东省开展了一项大规模的流行病学研究。
　　 方法：2005年10月至2007年10月，我们收集了一个覆盖广东省21个地区的健康人群，其中健康男性1616例(Test set)。我们对七个公认的鼻咽癌的潜在危险因素如吸烟、饮酒、饮茶、儿童时期饮食咸鱼、腌菜以及中草药使用情况等进行了详细记录。对问卷调查时收集的外周血采用传统的免疫酶法进行EB病毒壳抗原抗体(VCA-IgA)的检测并采用卡方检验、非条件logistic回归等分析这些因素与VCA-IgA的关联。为了进一步验证结果，我们于2008年10月在鼻咽癌高发区——四会市收集了1674例健康男性的信息和外周血(Validation set)，并测定血中VCA-IgA和EBV核抗原抗体(EBNA1-IgA)的水平。采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理。
　　 结果：最终进入分析的有来自Test set的1571名健康男性和来自Validation set的1657名健康男性。吸烟是被确定的唯一与EBV血清阳性有显著关联的因素。吸烟累计暴露量高的人其血清EBV阳性的风险较高(Ptrend=3.62×10-5)。更令人鼓舞的是，这一结果在Validation set中得到了很好的验证(Ptrend=0.001)。将两个人群合并后分析不同香烟暴露剂量对EBV血清学状态的影响，结果发现和从不吸烟者相比，当吸烟暴露量＜15，=15-30，和≥30包年时，其EBV血清学阳性的风险比分别为1.77(95％置信区间[CI]，1.34-2.33)，1.98(95％CI，1.50-2.61)和2.52(95％CI，1.90-3.35)。有趣的是，戒烟者的血清中EBV阳性的风险比明显降低，当香烟暴露量＜30和≥30包年时，其EBV血清学阳性的风险比分别为1.50(95％CI，1.04-2.16)和1.71(95％CI，0.96-3.04)(Ptrend=0.04)。
　　 结论：在鼻咽癌高发区——广东省健康男性中，吸烟与EBV的再激活紧密相关。吸烟暴露量越大的人其血清EBV抗体滴度越高。因此，在鼻咽癌高发地区提倡戒烟将有助于降低当地男性居民血清中EBV的水平，有可能进一步降低当地鼻咽癌的发病率。
　　 第二部分：CYP1A1基因与鼻咽癌易感性的关联分析。
　　 目的：利用以核心家系为基础的关联研究探讨细胞色素P450酶系CYP1A1基因中m1和m2遗传多态性并分析其与鼻咽癌易感性的关联。
　　 方法：收集457个广东鼻咽癌核心家系(每个核心家系由患者和父母或同胞构成)共2134个成员作为研究对象，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对CYP1A1基因中m1(MspI)和m2共2个单核甘酸多态性(SNP)位点(其参考编号分别为rs4646903和rs1048943)进行基因分型。随机挑选聚合酶链反应(PCR)产物测序验证其基因型。运用家系为基础的相关性检验(Family-BasedAssociation Test，FBAT)软件分析这两个SNPs位点的基因型及其单体型与鼻咽癌易感性之间的关联。
　　 结果：FBAT分析结果显示：CYP1A1基因的m1(MspI)多态性与鼻咽癌的易感性之间无相关性(x2=2.399，P=0.301)；m2多态性在EB病毒壳抗原抗体(VCA-IgA)＜1∶80即低滴度组中，在累加模式和显性模式下，其等位基因G显示了从亲代到子代传递减少(Z=-2.120，P=0.034；Z=-2.303，P=0.021)，全局统计仍存在该趋势(x2=5.394，P=0.067)。单体型“T-G”可以降低鼻咽癌的发病风险(Z=-2.002，P=0.045)，“T-A”可能增加鼻咽癌的发病风险(Z=1.909，P=0.056)，全局统计表明CYP1A1基因单体型可能与鼻咽癌易感性有关(x2=7.067，P=0.070)。
　　 结论：以家系为基础的相关性研究发现CYP1A1基因m2多态的等位基因G可能与鼻咽癌的发病风险降低有关，m1多态性与鼻咽癌的易感性之间没有显著的相关性。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

第一部分 鼻咽癌高发区EB病毒环境激活物的流行病学研究

第1章 材料和方法

第2章 结果

第3章 讨论

第二部分 CYP1A1基因与鼻咽癌易感性的关联分析

第1章 材料和方法

第2章 结果

第3章 讨论

结束语

参考文献

附表 缩略词表

在读期间发表的论文

致 谢