HBsAg刺激树突状细胞后MicroRNA表达谱的变化

摘要

目的：以乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)诱导刺激小鼠髓系树突状细胞(DC)，利用芯片技术检测刺激前后细胞microRNA(mRNA)表达情况，了解HBsAg刺激DC前后miRNA表达谱的变化，为研究miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中的作用提供新线索。
　　 方法：首先，体外利用GM-CSF、IL-4等因子诱导培养未成熟树突状细胞，TNF-α诱导成熟，使用优化后的实验条件进行原代DC培养，用倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法鉴定培养出的原代DC。其次，培养所得imDC分为四组：未刺激组(A组)、HBsAg、LPS、TNFα分别刺激组(即BCD组)。用TRIZOL法抽提细胞总RNA，并纯化后，利用吸光光度计、Agilent2100生物分析仪等方法鉴定RNA质量，确保下一步实验结果的准确性。最后，利用基因芯片技术，将细胞miRNA与小鼠miRNA芯片杂交，采用图像软件等技术进行数据转换分析及校正。三个刺激组分别与未刺激组的miRNA表达谱进行比较。筛选出HBsAg刺激组部分差异表达较显著的miRNA，利用计算机软件技术对部分显著表达的miRNA进行靶基因初步预测。
　　 结果：利用改良后的方法可体外培养出纯度较高、数量较大的小鼠髓系DC。HBsAg刺激前后miRNA差异表达2倍以上者共30个，其中16个上调，14个下调。三个不同刺激组间miRNA差异谱存在不同差异。筛选出的靶基因中包含DC信号通路的相关成分。
　　 结论：发现HBsAg刺激小鼠髓系DC前后miRNA表达谱存在较大差异；HBsAg刺激组与LPS、TNFα组的miRNA差异谱存在较大差异，提示HBsAg刺激DC后的miRNA表达谱的变化可能存在特异性。靶基因的初步筛选结果进一步提示了miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中可能起着重要作用。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一章材料与仪器

1.1主要试剂

1.2主要试剂配制方法

1.3主要仪器设备

第二章实验方法

2.1原代细胞培养

2.2 microRNA表达差异谱的检测

第三章实验结果

3.1 DC鉴定

3.2总RNA质量检测结果

3.3 microRNA表达谱的检测

第四章讨论

4.1小鼠髓系树突状细胞培养及鉴定

4.2总RNA质量分析结果

4.3 MicroRNA表达差异谱

4.4结论

参考文献

综述 MicroRNAs与病毒性肝炎

致谢