长链非编码RNA SOX21AS1在胃癌发生发展中的作用及主要机制的探讨

摘要

目的：
　　胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，目前仍缺乏有效的治疗措施，为了寻找新的胃癌生物标记物及有效的治疗靶点，在分子层面探索胃癌的发病机制非常重要。近年来，长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在胃癌中的作用受到广泛关注。本研究主要研究lncRNA基因表达谱在胃黏膜炎症恶性转变至胃癌过程中的变化，以及筛选出的lncRNA SOX21AS1对胃癌细胞生物学行为的影响和主要的作用机制。
　　方法：
　　我们首先在安徽省立医院内镜中心收集5例正常胃黏膜组织、5例萎缩胃炎伴肠上皮化生组织、5例进展期胃癌组织及5例癌旁组织，提取各组织总RNA进行lncRNA+mRNA人类基因芯片检测，筛选出具有差异性表达的lncRNA，荧光定量PCR检测筛选出的lncRNA SOX21AS1在各组织中的表达情况。然后合成过表达 SOX21AS1的慢病毒载体转染胃癌细胞 AGS和 BGC823，构建稳定过表达SOX21AS1的细胞株。运用流式细胞技术研究分析过表达SOX21AS1的胃癌细胞株细胞周期及凋亡的变化；划痕实验及Transwell实验判断过表达SOX21AS1对胃癌细胞迁移能力的影响；以及通过体内异种移植 BALB/c裸鼠模型判断过表达SOX21AS1对肿瘤生长的影响。最后通过荧光定量PCR和Western bolt实验探索SOX21AS1可能的作用机制。
　　结果：
　　通过高通量基因芯片分析技术，以倍数变化FC>2且校正后P<0.05为标准，我们筛选出176个lncRNA和215个mRNA在萎缩性胃炎组织异常表达，1428个lncRNA和3035个mRNA在胃癌组织中异常表达。在胃黏膜炎症恶性转变过程中均有变化的lncRNA有11个，包括p33715，p29027（H19），p7811，p6625（MIR22GH），p1457，p8725（CTD-3064h18.6），p38190-v4，p4300，p43909-v4，p36288-v4，p38901-v4。本研究选择 p4300即 SOX21AS1作为研究对象，通过荧光定量PCR检测各组织中SOX21AS1的表达，发现从正常胃黏膜、萎缩性胃炎到胃癌组织中其表达逐渐下调。同时通过成功构建稳定过表达SOX21AS1细胞株，体外实验证明了SOX21AS1过表达可以使AGS胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期，抑制DNA合成，使细胞分裂增殖减弱，促进胃癌细胞凋亡，抑制胃癌细胞迁移。体内异种移植裸鼠实验显示，过表达 SOX21AS1可以使裸鼠体内肿瘤生长缓慢（P<0.001），抑制胃癌细胞成瘤性，过表达SOX21AS1瘤体的质量（0.16±0.05g）明显低于空白对照（0.91±0.35g）与阴性对照组（0.90±0.30g）。此外，荧光定量PCR结果显示，SOX21基因的表达与lncRNA SOX21AS1表达明显正相关（P<0.01），Western bolt结果显示正常胃黏膜组织经萎缩性胃炎发展到胃癌过程中SOX21蛋白表达量逐渐下调，CDX2在此过程中逐渐上调。同时，在细胞水平检测结果证明，过表达SOX21AS1的胃癌细胞株中SOX21蛋白表达升高，而CDX2蛋白表达量下降。
　　结论：
　　lncRNA SOX21AS1作为一个新的潜在的抑癌基因在胃黏膜炎症恶性转变过程发挥重要的作用，它可以通过调节SOX21-CDX2通路促进胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞增殖和迁移，同时可以抑制异种移植裸鼠模型体内肿瘤的生长。在理论上进一步完善lncRNA肿瘤调控网络，在临床应用方面，为寻找到新的胃癌生物标记物及治疗靶点提供参考。

目录

声明

英文缩略词

1.引言

2.材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 数据分析

3.结果

3.1 基因芯片检测结果

3.2 候选lncRNA SOX21AS1在组织样本中的表达

3.3 体外实验验证SOX21AS1对胃癌细胞生物学行为的影响

3.4 体内实验探索SOX21AS1对裸鼠成瘤性的影响

3.5 SOX21AS1发挥生物学作用的机制研究

4.讨论

5.结论

参考文献

附录

致谢

综述:微小RNA与胃癌关系的研究进展