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实验材料与仪器
1.1材料与试剂
1.1.1实验动物和细胞
1.1.2主要试剂
1.2 仪器
1.3 主要试剂和溶液的配制
2 实验方法
2.1小鼠动物模型的建立
2.2小鼠肝组织病理学检测
2.2.1 HE染色
2.2.2肝指数的测定
2.3 HepG2细胞培养和传代
2.4 细胞水平逆转实验
2.5 MTT实验
2.6 油酸诱导的脂肪变性
2.7 细胞的油红染色
2.8 甘油三脂的测量
2.9 CYP1A1-siRNA转染油酸诱导的HepG2细胞
2.10 BaP刺激作用
2.11 细胞超氧化物歧化酶（SOD）的测定
2.12 细胞活性氧（ROS）的测定
2.13肝脏/细胞丙二醛（MDA）的测定
2.14细胞4-羟基壬烯酸（HNE）的测定
2.15 Real-timePCR实验
2.15.1细胞总RNA的提取
2.15.2反转录
2.15.3 Realtime PCR测定CYP1A1和CYP1A2 mRNA的表达变化
2.16 细胞/组织总蛋白的提取
2.17 BCA蛋白定量
2.18 蛋白免疫印迹实验
2.19 统计学数据分析处理
3. 实验结果
3.1.1小鼠肝脏外观
3.1.2小鼠肝组织HE染色
3.1.3小鼠肝脏指数
3.1.4小鼠血清ALT及AST的含量变化
3.1.5 小鼠非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝逆转组肝组织中CYP1A1蛋白的表达变化
3.1.6丙二醛（MDA）在小鼠脂质积累模型组和脂质积累逆转组中的含量变化
3.2 细胞水平体外造脂质积累模型以及CYP1A1在脂质积累模型中的表达情况
3.2.1 MTT法检测不同浓度的油酸造模液对HepG2细胞増殖的影响
3.2.2油酸诱导的HepG2细胞造体外脂质积累模型的油红O染色结果和甘油三酯含量
3.2.3不同时间点CYP1A1蛋白在油酸刺激的HepG2细胞的表达变化
3.2.4不同时间点CYP1A1mRNA在油酸刺激的HepG2细胞中表达变化
3.3 体外细胞逆转实验
3.3.1 CYP1A1在逆转的HepG2细胞中的表达变化
3.3.2脂质积累模型组和脂质积累逆转组中脂质过氧化水平的变化
3.4 CYP1A1-siRNA对油酸刺激的HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2表达的影响
3.4.1 CYP1A1-siRNA对油酸刺激HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2蛋白表达的影
3.4.2 CYP1A1-siRNA对油酸刺激的HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2mRNA表
3.5 沉默CYP1A1的表达降低脂质积累模型中的氧化应激和脂质过氧化作用
3.5.1 CYP1A1-siRNA 对油酸诱导的HepG2细胞中ROS和SOD水平的影响
3.5.2 CYP1A1-siRNA 对HepG2细胞中MDA和HNE水平的影响
3.6苯并芘（BaP）通过刺激CYP1A1的高表达加重油酸刺激的HepG2细胞中的脂质过氧化作用
3.6.1在苯并芘（BaP）处理HepG2细胞中 CYP1A1的mRNA和蛋白的表达变化
3.6.2 苯并芘（BaP）对HepG2细胞中MDA和SOD的影响
4. 讨论
5. 结论
