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野生一粒小麦(Triticum monococcum L.)同型半胱氨酸甲基转移酶Homocysteine S-Methyltransferases基因克隆及功能分析

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第一章 文献综述

1.1引言

1.2植物硒吸收代谢的研究进展

1.2.1植物对硒的吸收

1.2.2 硒在植物体内的形式

1.2.3 硒对植物的影响

1.2.4同型半胱氨酸甲基转移酶(HMT)的研究进展

1.3富硒小麦的研究进展

1.3.1小麦硒营养的研究进展

1.3.2 富硒小麦的培育

1.4小麦分子育种的重要材料:一粒小麦

1.5论文选题依据

1.6主要研究内容及技术路线

1.6.1主要研究内容

1.6.2技术路线

第二章 野生一粒小麦HMT1基因的克隆及生物信息学分析

2.1引言

2.2材料与方法

2.2.1材料

2.2.2实验仪器、试剂

2.2.3提取植物总RNA

2.2.4 RNA完整性检测

2.2.5总RNA 纯度检测

2.2.6 引物设计

2.2.7 RNA反转录

2.2.8 PCR扩增野生一粒小麦10-1HMT1基因

2.2.9 目的片段的回收

2.2.10加“A”

2.2.11 pGEM-T Easy载体链接

2.2.12 连接产物转DH5α细胞

2.2.13 重组克隆筛选

2.2.14穿刺

2.2.15 送样测序

2.3结果与分析

2.3.1野生一粒小麦10-1HMT1基因的克隆和序列分析

2.3.2 TmHMT1基因序列与AetHMT1基因比对分析

2.3.3 TmHMT1同源性比对分析

2.4讨论与结论

第三章 野生一粒小麦HMT1基因的生化特性分析

3.1引言

3.2材料和方法

3.2.1设计特异性引物及PCR扩增

3.2.2实验试剂及仪器

3.2.3 摇菌后培养

3.2.4 提取克隆质粒

3.2.5获得大量目的片段

3.2.6 酶切、连接目的条带,构建重组原核表达载体

3.2.7诱导表达重组质粒菌株及优化表达条件

3.2.8 SDS-PAGE鉴定

3.3结果与分析

3.3.1野生一粒小麦10-1HMT1基因原核表达载体的构建和重组子的鉴定

3.3.2目的蛋白的诱导表达、条件优化及SDS-PAGE分析

3.4讨论与结论

第四章 野生一粒小麦HMT1基因的功能验证

4.1引言

4.2材料与方法

4.2.1材料

4.2.2实验试剂及仪器

4.2.3 TmHMT1基因时空特性分析

4.2.4转TmHMT1基因细菌耐硒性研究

4.2.5转TmHMT1基因细菌富硒性研究

4.2.6样品消解

4.2.7仪器条件

4.2.8标准曲线的绘制

4.2.9样品测定

4.3结果与分析

4.3.1转TmHMT1基因细菌耐硒性分析

4.3.2转TmHMT1基因细菌富硒性分析

4.3.3 TmHMT1基因时空表达特性研究

4.4讨论与结论

第五章 结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

致谢

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