我国原料奶污染蜡样芽孢杆菌的调查与鉴定及特征性蛋白的分析研究

摘要

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌，它能引起胃肠感染和非胃肠感染。肠毒素、催吐型毒素、溶血素、磷脂酶C以及像B-内酰胺酶、蛋白酶、胶原酶之类的许多酶类都是蜡样芽孢杆菌所产生的潜在的致毒因子。蜡样芽孢杆菌菌体细胞的S-层具有特殊的表面结构，它在吸附宿主，吞噬作用及耐辐射性等方面起到很重要的作用。随着与蜡样芽孢杆菌相关的疾病，尤其是由它引起的食物中毒的增多，近年来人们对蜡样芽孢杆菌越来越关注。本研究对我国十个地区的原料奶中微生物污染情况进行调查与鉴定，主要检测原料奶中蜡样芽孢杆菌数，以及菌落总数和大肠菌群数，确定原料奶中微生物的污染状况与蜡样芽孢杆菌污染的关系。同时研究和摸索了蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离纯化技术。 结果表明，十个地区的蜡样芽孢杆菌数平均值均≤105CFU/mL。而细菌总数平均值，天津地区为5.45×105CFU/mL，张家口为7.61×105CFU/mL，郑州为1.99×105CFU/mL，这三个地区均在国家标准线之内。而烟台、哈尔滨、肇东、海拉尔、朔州、杭州和南京这七个地区的原料奶菌落总数平均值则在106～107CFU/mL，都属于超标奶。综合分析得出蜡样芽孢杆菌数与原料奶的微生物污染状况没有相关性。本试验也对原料奶的溯源奠定了基础。研究发现从蜡样芽孢杆菌中分离出三种分子量约为28.5、26.5和20KDa的特征性蛋白，而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌中则没有这些特征性蛋白，为免疫金标技术的发展奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

1.1课题研究背景

1.1.1蜡样芽孢杆菌研究的相关背景

1.1.2蜡样芽孢杆菌引起的胃肠型感染

1.1.3蜡样芽孢杆菌引起的非胃肠型感染

1.1.4蜡样芽孢杆菌产生的毒性因子

1.1.5 S蛋白对附着、吞噬作用和辐射敏感性的影响

1.1.6食源性致病菌的相关检测方法

1.1.7食品中蜡样芽孢杆菌检测方法研究现状

1.1.8微生物对原料奶污染的研究现状

1.2课题研究的依据

1.3课题研究的意义

1.4课题主要研究的内容

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.1.1原料奶

2.1.2主要化学试剂

2.1.3实验菌种

2.1.4培养基

2.1.5实验仪器

2.2试验方法

2.2.1原料奶取样方法

2.2.2菌落总数的测定方法

2.2.3蜡样芽孢杆菌的检验

2.2.4大肠菌群的测定

2.2.5蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

2.2.6巨大芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌蛋白的分离与纯化

2.2.7 SDS-PAGE测定菌体蛋白的分子量

第三章结果与分析

3.1原料奶样品中菌落总数的测定及分析

3.2原料奶中可疑蜡样芽孢杆菌数的检测与分析

3.3原料奶中可疑蜡样芽孢杆菌的鉴定与生化分型

3.3.1蜡样芽孢杆菌菌体形态的观察

3.3.2蜡样芽孢杆菌生化反应鉴定

3.3.3蜡样芽孢杆菌的生化分型鉴定

3.4大肠菌群的测定

3.5我国十个地区原料奶微生物污染程度与蜡样芽孢杆菌污染状况的关系比较

3.6蜡样芽孢杆菌及与其亲缘关系较近的菌株的SDS-PAGE图谱

第四章结论

4.1研究取得的结论

4.1.1原料奶的卫生学指标分析

4.1.2蜡样芽孢杆菌的调查和检测

4.1.3蜡样芽孢杆菌污染的因素

4.1.4蜡样芽孢杆菌及其相关菌株菌体蛋白的提取

4.2研究取得的创新点

4.3实验中还需进一步解决的问题

4.4研究展望

参考文献

论文、参加科研情况说明

致 谢