声明
引言
1.材料
1.1材料、仪器
1.1.1 细胞系
1.1.2 试剂与耗材
1.1.3 仪器与设备
2实验方法
2.1细胞培养
2.1.1 细胞复苏
2.1.2 细胞冻存
2.1.3 细胞换液
2.1.4 细胞传代
2.2乳腺癌顺铂耐药MCF-7/DDP细胞的耐药指数检测
2.3 CCK-8实验方法检测乳腺癌及耐药细胞的存活率
2.3.1 细胞接种
2.3.2细胞培养及加药处理
2.3.3 显色
2.3.4 比色
2.4 集落克隆形成试验检测LCL161对肿瘤细胞增殖的影响
2.4.1 细胞种板
2.4.2 细胞培养及实验加药
2.5 ATP 检测
2.6 Annexin-V/PI双染流式细胞分析法检测凋亡
2.6.1 细胞接种
2.6.2 细胞加药处理
2.6.3 上机检测及结果分析
2.7 免疫印迹法检测蛋白表达
2.7.1 细胞蛋白提取
2.7.2 二喹啉甲酸法（BCA法）蛋白定量
2.7.3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.8 透射电镜实验
2.9 SiRNA转染
2.9.1 沉默序列设计
2.9.3 转染并筛选最佳SiRNA 片段
2.9.5 细胞种板
2.9.6转染
2.10 免疫荧光
3. 统计学处理
4.实验结果
4.1 乳腺癌MCF-7/DDP细胞顺铂耐药性检测
MCF-7/DDP 耐药细胞模型的建立
4.2体外抗肿瘤细胞的活性
4.2.1 LCL161降低乳腺癌顺铂耐药细胞MCF-7/DDP的存活率
4.2.2在Caspase抑制条件下，LCL161诱导乳腺癌耐药MCF-7/DDP细胞发生更剧烈的细胞死亡
4.2.3 LCL161和z-VAD-fmk联用抑制细胞集落形成
4.3 z-VAD-fmk增强了LCL161诱导的MCF-7/DDP细胞凋亡
4.4 LCL161和z-VAD-fmk联合降低了细胞内ATP水平
4.5 LCL161和z-VAD-fmk联合诱导MCF-7/DDP细胞的坏死性凋亡蛋白的表达上调
4.5.1 RIP1是LCL161在Caspase酶抑制条下诱导产生坏死性凋亡的关键蛋白
4.5.2 LCL161和z-VAD-fmk在Caspase抑制条件下联合诱导RIP3发生坏死性凋亡
4.6免疫荧光检测到LCL161和z-VAD-fmk联合诱导MCF-7/DDP细胞产生坏死性凋亡蛋白
4.7电镜试验观察到LCL161和z-VAD-fmk处理后，细胞发生坏死性凋亡
4.8使用siRNA干扰RIP3表达，保护了LCL161和z-VAD-fmk诱导MCF-7/DDP细胞的坏死性凋亡作用
5. 讨论
6. 结论
参考文献
致谢
附录A英文词汇对照表
附录B常用试剂配置方法
附录C个人简介
附录D研究生期间成果
附录E综述:IAP蛋白家族及SMAC模拟物研究进展
