骨髓库姆试验(+)血细胞减少患者骨髓细胞自身抗体IgG破坏和/或抑制骨髓造血的机制研究

摘要

目的: 初步探讨骨髓单个核细胞库姆（BMMNC-Coombs）试验（+）血细胞减少（又称免疫相关性全血细胞减少，immunorelated pancytopenia，IRP）患者骨髓造血细胞自身抗体IgG破坏和/或抑制造血机制。 方法: 选取IRP患者为研究对象，以重型再生障碍性贫血（SAA）及正常人分别为病例及正常对照，进行下述研究：第一部分IRP患者骨髓红系造血岛（EI）形成机制。（1）采用流式细胞术（FACS）检测IRP患者骨髓细胞（CD34+、CD15+及GlycoA+细胞）膜抗体（IgG、IgM）类型；（2）采用免疫荧光（IF）法标记48例IgG（+）的IRP患者骨髓EI，观察自身抗体IgG在EI分布；（3）探讨EI自身抗体分布与IRP患者病情相关性。第二部分骨髓巨噬细胞（MФ）数量、活化抗原表达及功能研究。（1）采用流式细胞术（FACS）检测IRP患者骨髓细胞（CD34+、CD15+及GlycoA+细胞）膜抗体（IgG、IgM）类型；（2）采用FACS检测61例IgG（+）IRP患者骨髓MФ数量[（CD68+/CD45+）%]、活化抗原（CD69）表达水平[（CD68+CD69+/CD68+）%]；（3）采用鸡红细胞（CRBC）吞噬试验评价骨髓MФ吞噬率和吞噬指数。第三部分骨髓造血细胞膜功能受体封闭研究。FACS检测骨髓GlycoA（+）细胞膜EPO受体（EPOR）和自身抗体IgG；在含不同浓度EPO的培养基中培养骨髓干祖细胞，7天检测红系集落（CFU-E）产率。 结果: 第一部分:（1）48例IRP患者中有14例（29.17%）骨髓“EI”的IF阳性，即EI中巨噬细胞和幼红细胞间沉积自身抗体IgG。（2）这14例患者骨髓GlycoA（+）细胞膜上均（100%）测及自身抗体IgG，贫血是首发症状，以重度贫血为主[重度贫血9例（64.29%），中度贫血5例（35.71%）]；余34例未测及EI中有自身抗体IgG沉积者仅2例（5.89%），其贫血程度轻。（3）14例EI有自身抗体IgG沉积患者的网织红细胞比例[（2.0±0.8）%]、胸骨红系比例[（44.1±13.9）%]及间接胆红素水平[（9.4±4.7）mmol/l]均明显高于EI中无IgG沉积者[（1.3±1.0）%，（29.8±8.2）%，（6.6±6.7）mmol/l]（P<0.05），而前者的血红蛋白水平[（59.6±16.2）g/l]低于后者[（83.4±25.0）g/l]（P<0.05）。（4）EI有自身抗体IgG沉积患者3、6个月总有效率（57.14%、85.71%）优于EI无自身抗体IgG沉积患者（P<0.05）（32.26%、61.29%）。 第二部分:61例IRP患者骨髓MФ数量、活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（0.57±0.30）%，（40.30±18.49）%，（37.56±15.20）%和（0.75±0.34）]均高于10例SAA患者[（0.46±0.08）%，（32.44±19.37）%，（28.26±10.46）%和（0.59±0.39）]及13名正常人[（0.44±0.69）%，（29.71±11.67）%，（25.63±14.75）%和（0.55±0.16）]（P<0.05）；且MФ数量与活化抗原表达、吞噬率及吞噬指数均呈正相关（r=0.89，p<0.01；r=0.43，p<0.01；r=0.40，p<0.01）。根据MФ数量将IRP患者分为A组（MФ≥0.5%）和B组（MФ<0.5%），A组34例患者中32例（94.12%）自身抗体为IgG，B组27例患者中仅2例（7.41%）自身抗体为IgG；A组患者MФ的活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（49.19±16.63）%，（46.62±13.38）%，（0.91±0.36）]显著高于B组患者[（29.11±14.30）%，（28.67±12.59）%，（0.61±0.30）]（P<0.05），而B组患者与SAA及正常人无显著性差异（P>0.05）。将34例BMMNC-IgG（+）型患者分为MФ高（≥0.75%）、低水平（<0.75%）2组，25例（73.53）MФ低水平患者均仅能检测到一系骨髓细胞（CD34+/或CD15+/或GlycoA+）有IgG，9例（23.53%）MФ高水平患者有8例能检测到二系骨髓细胞有IgG，1例（2.94%）是三系骨髓细胞均有IgG； MФ高水平的IRP患者MФ的活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（56.12±15.11）%，（60.22±12.51）%，（1.23±0.23）]显著高于MФ低水平患者[（44.58±18.16）%，（43.32±9.24）%，（0.84±0.24）]（P<0.05）。MФ高水平患者外周血红细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数均显著低于MФ低水平患者（P<0.05）；MФ高水平患者的网织红细胞比例、胆红素水平及胸骨红系比例均显著高于MФ低水平患者（P<0.05）。 第三部分:（1）24例骨髓GlycoA（+）细胞膜IgG（+）的IRP患者骨髓GlycoA（+）细胞膜EPOR水平[（4.16±0.15）%]显著低于10名正常人[（6.04±0.48）%]（P<0.05）。（2）这些IRP患者骨髓细胞体外培养，CFU-E产率与EPO浓度的关系呈两种形式：EPOR低水平组1的拟合方程为：y=1.0028x-2.0056，（P<0.05，g<0.05），回归检验有显著性，失拟检验回归方程拟合良好，呈线性关系，提示有增长趋势；EPOR低水平组2数据行拟和检验结果：F=0.25，P=0.6264，g=0.16，为非线性关系，无增长变化趋势；正常人拟合方程为：y=0.68915x-1.9783（P<0.05，g<0.05），回归检验有显著性，失拟检验回归方程拟合良好，呈线性关系，提示有增长趋势。 结论: IRP患者自身抗体IgG抑制和/或破坏骨髓造血的机制可能是： （1）激活MФ吞噬和破坏带有自身抗体IgG的骨髓造血细胞导致骨髓造血功能衰竭； （2）部分自身抗体IgG通过与骨髓造血细胞膜功能抗原（如EPOR）结合，使骨髓造血细胞缺乏必需造血生长因子刺激从而影响其增殖和分化。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、IRP患者骨髓红系造血岛形成机制研究

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、IRP患者骨髓巨噬细胞数量、活化抗原表达及功能研究

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4、小结

三、IRP患者膜功能抗原封闭的研究

3.1对象和方法

3.2结果

3.3讨论

3.4、小结

结论

展望

参考文献

附图/表(1)

附图/表(2)

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述一 骨髓红系造血岛研究进展

综述二 自身免疫性疾病中巨噬细胞功能、B淋巴细胞功能亢进累及造血系统的研究进展

致谢