抑制素主动免疫对雌性大鼠生殖激素和卵巢发育的影响：FA和Montanide佐剂效应的比较

摘要

抑制素的基本生物学作用是抑制FSH合成和分泌，利用抑制素主动免疫可以提高家畜的排卵率和产仔数，从而提高繁殖力。近年来国内外研究者利用抑制素的这一特性，主动免疫猪、牛、羊等家畜，在提高繁殖力方面取得了一定的研究进展。目前它作为一种多胎疫苗已成为提高动物生殖能力的新途径，其研究和应用前景非常广阔。然而，大多数研究者使用只含有一个抗原决定簇的抑制素合成肽片段或重组蛋白作为免疫原，并使用传统弗氏佐剂，其免疫效果仍不堪理想，且不同研究者研究结果差异较大。与此同时，弗氏佐剂产生严重的炎症反应，出于动物福利的考虑，弗氏佐剂不宜于动物生产中应用。因此，本研究首次将含有两个抗原决定簇的新疆细毛羊抑制素α亚基成熟区序列的重组融合蛋白（roINH）作为免疫原，并比较了Montanide（MON）佐剂和传统弗氏佐剂（FA）在roINH主动免疫大鼠后的免疫效果。以寻求一种免疫效果好，炎症反应小（副作用小），能在动物实际生产中应用的佐剂。所得研究结果为抑制素α亚基成熟区序列的重组融合蛋白主动免疫提供理论基础和数据资料，具有重要的科研价值和实践意义。 主要的研究工作和取得的结果如下： 为测定抗体，激素等指标，将60只体重为220．6±17．2 g的性成熟雌性SD大鼠随机分成三组，每组20只，各处理组分别为：（1）FA佐剂组（CFA+roINH用于首次免疫；IFA+roINH用于加强免疫），（2）MON佐剂组（MON+roINH），（3）对照组（注射0．9％NaCl），试验期共免疫三次，每次皮下注射0．5 mL，含1 mg免疫原。以第一次免疫当天为试验的0天，分别在试验的第20和40天进行加强免疫，方式和剂量同首次免疫。在试验的0，10，20，30，40，50天从大鼠尾静脉采血以测定抗体滴度；从第50天开始，每隔6小时采一次血，连续采血5天，用于测定血液中促卵泡素（FSH），促黄体素（LH）和孕酮（P）的含量。分别在第二次和第三次免疫10天后的动情期，用乙醚麻醉后将其处死，观察卵泡发育情况。为观察动物的炎症反应，将50只体重为220．6±17．2 g的性成熟雌性SD大鼠随机分成四组：（1）FA佐剂组（CFA+roINH）（n=20），（2）MON佐剂组（MON+roINH）（n=20），（3）蛋白组（roINH）（n=5），（4）对照组（0．9％ NaCI）（n=5），1-2组分别在腹侧面皮下注射0．1 mL，含1 mg的免疫原，3组注射0．1 mL，只含1 mg roINH的免疫原，4组只注射0．1 mL0．9％NaCl。分别在注射后第2，5，7，14，28天取注射部位用于组织切片，并同时测量脓疱（炎症反应）直径。 免疫组（MON佐剂组和FA佐剂组）血清中抗体滴度在首次免疫后持续增加，在第50天到达高峰，在第20和40天，MON佐剂组抗体滴度显著高于FA佐剂组（P<0．05）。在抑制素第二次免疫10天后动情期，FA佐剂组成熟卵泡数（32．83±4．49个）显著高于对照组（26．83±4．36个）（P<0．05）；而MON佐剂组成熟卵泡数（28．80±3．96个）和对照组相差不多（P>0．05）。在抑制素第三次免疫10天后动情期，MON佐剂组成熟卵泡数和FA佐剂组成熟卵泡数（分别为35．00±4．12个和35．2±1．64个）均显著高于对照组（28．67±1．58个）（P<0．05）。两次加强免疫后，抑制素抗体阳性鼠抗体滴度与成熟卵泡数（r=0．727）和卵巢重量（r=0．716）均呈极显著正相关（P<0．01）。在抑制素第三次免疫10天后的整个发情周期内，MON佐剂组血清中FSH的平均浓度（9．96±1．01mIU/mL）和FA佐剂组（11．34±1．42 mIU/mL）是对照组FSH平均浓度（3．20±0．56mIU/mL）的3-4倍（P<0．01），两免疫组间FSH平均浓度均差异不显著，峰值处MON佐剂组和FA佐剂组FSH浓度（分别为：25．36±2．62 mIU/mL和30．24±1．04 mIU/mL）均显著高于对照组（P<0．01）。MON佐剂组和FA佐剂组血液中LH平均浓度（分别为：5．81±0．58 mIU/mL和6．52±0．77 mIU/mL）与对照组（6．09±0．78 mIU/mL）相比均差异不显著，孕酮（P）平均浓度的结果和LH相似，两免疫组和对照组P平均浓度均无差异（MON佐剂组为3．39±0．48 ng/mL； FA佐剂组为2．90±0．48 ng/mL；对照组为3．19±0．51ng/mL）。 抑制素主动免疫后，MON佐剂组和FA佐剂组免疫后炎症反应程度有所不同，在免疫后第2和7天时MON佐剂组脓包直径小于FA佐剂组（P<0．05），在第28天时，MON佐剂组脓包直径显著小于FA佐剂组（P<0．01）。整个试验期间蛋白组（只注射roINH）和生理盐水组均没有组织学上可见损伤。 以上结果表明：应用抑制素α亚基成熟区蛋白作为免疫原主动免疫大鼠时，MON佐剂和FA佐剂均可产生较好的生物学效应，促进了大鼠卵泡发育和提高了大鼠血中FSH、P激素水平；与此同时，MON佐剂在免疫后第20和40天产生的抗体滴度显著高于FA佐剂，且引起的炎症反应比FA佐剂组弱。因此，MON佐剂更适宜于动物生产。

目录

文摘

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声明

第一章 文献综述

1.抑制素概述

1.1 抑制素的来源

1.2 抑制素的结构与特性

1.3 抑制素的生物学作用

1.4 抑制素的作用机理

1.5 抑制素免疫在动物繁殖中的应用

2.主要研究内容和目的意义

第二章 试验部分

1.材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 数据分析

2.结果

2.1 抑制素免疫后大鼠血清中抗体滴度

2.2 抑制素免疫后动情期卵巢发育

2.3 抑制素免疫后血液中抑制素抗体滴度和卵巢发育的相关性

2.4 抑制素免疫后血清中生殖激素含量

2.5 炎症反应及组织学变化

3.讨论

3.1 抑制素α重组蛋白的免疫原性

3.2 加强免疫对免疫效果的影响

3.3 抑制素免疫对卵泡发育的影响

3.4 抑制素免疫对血液中生殖激素的影响

4.结论

参考文献

致谢