中药有效成分复方对猪口蹄疫疫苗的佐剂效果及相关机理研究

摘要

口蹄疫是一种急性、高度接触性人畜共患传染病，有“政治经济病”之称，严重危害畜牧业的发展。猪口蹄疫的预防中使用的各种灭活苗、活苗、基因工程亚单位苗、合成肽苗、基因缺失苗等，都存在免疫期短、保护率低、副作用大等缺陷。使用佐剂是提高疫苗抗原免疫效果的有效方法，但现有佐剂还存在着一系列问题，所以很需要效果理想的免疫佐剂来提高免疫原性。近年来，随着对内皮细胞功能研究的不断深入，发现微血管内皮细胞（microvascular endothelial cells，MVECs）在机体免疫中起着十分关键的作用，通过激活、调理微血管内皮细胞功能以提高免疫效果是当今国际的研究热点之一。但目前，我国在MVECs的研究，仅在医学心血管疾病领域有所涉及，对于MVECs在感染免疫方面的研究还很少有研究者涉足。 本试验旨在从增加Th1免疫、诱导IFN-γ及保护MVECs的角度筛选出中药有效成分，并组成复方，研究其免疫增强机制，为进一步研究得到一种新型的、经济的猪口蹄疫疫苗佐剂提供依据，提高现有疫苗的保护力，降低猪口蹄疫的发病率。 试验以黄芪多糖、人参皂甙Rb1、丹参素、硫酸软骨素为代表，首先将有效成分复方与口蹄疫疫苗混匀，通过肌肉注射免疫小鼠，观察口蹄疫抗体效价的变化。随后进行乳鼠心肌膜MVECs（rat myocardium MVECs，RMMVECs）的培养，培养不同时间段，采用ELISA方法和免疫细胞化学方法，检测中药有效成分及其复方对RMMVECs分泌细胞因子和表达免疫相关膜分子的影响，研究结果如下。 复方佐剂疫苗高剂量组、复方佐剂疫苗中剂量组一免后15 d抗体效价与疫苗组比较差异显著（p<0．05），复方佐剂疫苗低剂量组与疫苗组比较差异不显著（P>0．05）；复方佐剂疫苗高剂量组二免后15d抗体效价与疫苗组差异极显著（P<0．01），复方佐剂疫苗中剂量组二免后15 d抗体效价与疫苗组差异显著（P<0．05），复方佐剂疫苗低剂量组与疫苗组比较差异不显著（P>0．05）；复方佐剂疫苗高剂量组二免后30 d抗体效价与疫苗组差异极显著（P<0．01），复方佐剂疫苗中剂量组二免后30 d抗体效价与疫苗组差异显著（P<0．05），复方佐剂疫苗低剂量组二免后30 d抗体效价与疫苗组差异显著（P<0．05）。总之，中药有效成分复方三个剂量组均能提高小鼠的口蹄疫抗体效价，并且于二免后30 d即达到合格的免疫水平（HAlog2>7）。 中药有效成分及其复方能显著提高RMMVECs分泌IFN-γ其分泌IFN-γ与空白对照组比较差异显著（P<0．01或P<0．05）；同时复方也能降低口蹄疫疫苗导致的RMMVECs分泌TNF-α量升高。中药有效成分及其复方能促进细胞表面VCAM-1、MHC-Ⅱ膜分子的表达，细胞呈深棕色着色，阳性细胞明显增多。 试验结果表明：中药有效成分复方能起到疫苗佐剂的作用，提高口蹄疫疫苗的抗体效价，调节RMMVECs分泌及表达功能，能保护RMMVECs免受损伤。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语索引

声明

1 引言

1.1 口蹄疫研究现状

1.2 免疫佐剂研究现状

1.3 MVECs研究现状

1.4 研究意义

2 试验材料

2.1 实验动物

2.2 主要仪器设备

2.3 药品及试剂

3 试验方法

3.1 口蹄疫中药有效成分复方佐剂疫苗免疫小鼠的抗体测定

3.2 RMMVECs的分泌及表达功能检测

4 试验结果

4.1 口蹄疫中药有效成分复方佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体效价结果

4.2 RMMVECs分泌功能的检测结果

4.3 RMMVECs表达功能的检测结果

5 讨论

5.1 中药有效成分复方提高口蹄疫抗体水平分析

5.2 中药有效成分复方对RMMVECs分泌功能的影响

5.3 中药有效成分复方对RMMVECs表达功能的影响

5.4 中药作为疫苗佐剂存在的问题探讨

6 结论

参考文献

致 谢

作者简介

附 录：主要溶液的配制