血红素加氧酶-1在大鼠肝移植急性排斥反应中的免疫调节作用

摘要

目的 建立MHC不相容的近交系大鼠原位肝移植(OLT)急性排斥模型，通过血红素加氧酶-1(HO-1)的诱导剂和抑制剂，分别诱导和抑制HO-l在肝组织中的表达，观察HO-1对大鼠肝移植术后肝功能的影响、移植物急性排斥分级、炎性细胞和细胞因子的表达，探讨HO-1在肝移植急性排斥反应中的免疫调节作用。 方法1．采用“二袖套管法”，通过Wistar→Wistar(或SD)作为ROLT前期技能训练，然后用MHC不相容的DA为供体， LEW大鼠为受体，建立稳定的ROLT急性排斥模型。2．实验分组：(1)A组：供体术前24h用HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP)，5mg／kg，腹腔注射，n=9；(2)B组：供体术前24h用：HO-1抑制剂锌原卟啉(znPP)，20mg／kg，腹腔注射，n=9；(3)C组：供体术前24h，腹腔注射生理盐水2ml作为对照组，n=8。3．观察指标：(1)ROLT术后各组一般情况，包括精神状态、饮食、体重、皮肤的黄染程度；(2)术后3d，7d检测血清TBIL，ALT的水平；(3)病理学检查：术后3d，7d取各组肝脏组织标本，苏木素-伊红(H&E)染色，依照Banff标准对各组大鼠进行排斥反应分级。髓过氧化物酶染色(MPO)观察组织中的嗜中性粒细胞的表达；免疫组化观察单核巨噬细胞(CD68)、淋巴细胞(CD3)以及核因子NF—κ B在肝组织中的表达。4．实时定量荧光-PCR测定和分析各组肝组织中IL-2，IL-10，和TNF-α的mRNA的表达。5．统计学分析：结果用均数 ±SD表示，各组比较用ANOVA方法，用SPSS11.5软件进行统计学分析。 结果1.通过大鼠肝移植的手术训练，熟练掌握了大鼠肝移植的手术方法，DA→LEW肝移植模型供体手术成功率为100％，受体成功率88.6％，存活3d以上(含3d)为74.3％。2.血清酶学检查：A组(CoPP)术后3d、7d血清ALT，TBIL明显低于B组和C组，有明显的统计学差异(P<0.05)，B组C组相比无明显统计学差异(P＞0.05)；3．病理检查术后3d，7d，A组排斥反应为Banff分级0～Ⅰ级(2～5分)；B组术后3d、7d,为Ⅱ～Ⅲ(5～9分)；C组术后3d、7d，为Ⅱ～Ⅲ(5～9分)。4．免疫组化病理学检查：A组CD3，CD68，NF-KB阳性细胞和MPO染色中性粒细胞的表达(阳性面积百分率 ±s,％)明显低于B组和C组(P<0.05)，B组和C组相比无明显统计学差异(P＞0.05)；5实时荧光定量-PCR检测：A组HO-1和IL-10mRNA表达的ACT值明显高于B组和C组，IL-2，TNF-α低于B组C组(P<0.05)，B组和C组相比无明显统计学差异(P＞0.05)。 结论1.DA→LEW大鼠肝移植模型具有强烈、稳定的急性排斥特征，是急性排斥相关研究的良好模型；2.CoPP诱导HO-1表达，可减轻ROLT术后肝功能损害和急性排斥反应的发生，与ZnPP抑制HO-1表达相比较有明显统计学意义(P<0.05)。3．组织学检查显示，HO-1表达可减少移植肝脏组织中淋巴细胞、中性粒细胞和巨噬细胞侵润，与抑制HO-1表达有明显差异(P<0.05)。4．HO-1表达可能通过减少移植物中促炎因子IL-2，TNF-α和NF-KB的表达，增加抗炎因子IL-10的表达。因此，HO-1通过抑制NF-KB和促炎因子，升高抗炎因子的水平，影响T细胞的活化与增殖，减少抑制物IRI损伤所致的炎症反应，从而发挥免疫调节的作用。

目录

论文说明：英文缩写及中文对照

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摘要

前 言

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 前言

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 材料和方法

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 结果

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 讨论

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 参考文献

第一部分大鼠原位全肝移植急性排斥模型的建立 插图

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 前言

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 材料和方法

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 结果

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 讨论

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 总结

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 参考文献

第二部分H0-1对大鼠肝移植急性排斥中免疫调节作用和机理研究 插图

文献综述血红素加氧酶-1在器官移植中的作用

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