D-半乳糖诱导生物体衰老与细胞衰老模型的实验研究

摘要

本研究拟通过对自由基的检测及细胞、生物体的衰老生物学改变相关性的研究，探讨D-半乳糖(D-galatose,D-gal)诱导后的自由基损伤，骨髓间充质干细胞(mcscnchymal stem cclls,MSCs)衰老、生物体衰老三者之间的相互关系，以期能够揭示在衰老过程中，自由基引起生物体衰老的细胞学机理，试图在生物体及细胞水平上建立一个良好的老化模型，为认识衰老和最终找到推迟衰老的方法提供实验平台。 研究方法: 1.小鼠衰老模型的建立：取昆明种小鼠40只，称重，随机分成2组，每组20只。分对照组、造模组；对照组每天给予生理盐水O.3 ml颈背部皮下注射，造模组给予5％D-galO.3 ml颈背部皮下注射。连续给药60d。 2.小鼠衰老指标的检测：观察两组小鼠的体征及行为学变化，检测大脑组织内、血清内SOD及MDA含量的变化，检测皮肤SOD、MDA及羟脯氨酸含量变化。 3.MSCs衰老模型的建立：取2月龄SD大鼠MSCs分离培养至第3代，置于含8g/L D-gal的培养液中再传至第3代作为诱导组，而在原培养液中继续培养至第6代的为对照组。 4.MSCs衰老指标的检测：通过光镜、透射电镜观察两组MSCs形态和结构变化，绘制两组细胞的生长曲线，进行β-半乳糖苷酶染色，流式细胞仪检测细胞周期分布变化和单细胞凝胶电泳检测DNA损伤方法检测其衰老后的生物学行为变化，检测两组细胞内SOD及MDA的含量变化。 研究结果： 1．小鼠衰老：(1)体征及行为的变化：造模前两组动物反应良好，毛发光滑，饮食正常，行动敏捷。造模组小鼠颈背部皮下注射D-gal后4周后部分小鼠体重开始减轻，行动缓慢，反应迟钝，毛发干枯发黄、缺乏光泽，双颊脱毛明显，尾部出现色素斑点沉着并逐渐加重，嗜睡。(2)皮肤改变：造模组较之对照组皮肤弹性降低，MDA明显升高,SOD、羟脯氨酸含量减少。(3)对自由基的作用的影响：造模组小鼠脑组织内、血清内SOD含量降低及MDA含量升高。 2．MSCs衰老：(1)诱导组MSCs镜下呈典型的衰老细胞形态，增殖速度减慢；对照组MSCs形态均匀，长势良好。(2)流式细胞仪检测表明加入D-gal诱导后90％MSCs停留在GdGx期，而S期和G<,2>/M期MSCs近于消失，并随诱导时间延长趋势越明显；对照组MSCs各期 比例正常。(3)诱导组约80％呈β-半乳糖苷酶活性阳性染色，对照组染色为阴性。(4)单细胞凝胶电泳示诱导组MSCs DNA有拖尾现象，对照组MSCs无DNA损伤。(5)对自由基的作用的：诱导组MSCs内SOD含量降低、MDA含量升高。 研究结论： D-gal能够诱导实验动物小鼠衰老，对SD大鼠MSCs的老化具有诱导作用，初步推断8g/L最适浓度，为研究衰老的机制及抗衰老提供了研究提供了一个较为理想的研究平台。

目录

摘要

1引言

2材料与方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

文献综述 细胞衰老的研究进展

附：公开发表的学术论文

声明

致谢