促血管生成素2调节淋巴管新生的实验研究

摘要

目的：基因敲除研究表明，促血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)与淋巴管的发育有关，但是淋巴管发育和新生及其调节十分复杂，Ang2在其中的作用机理并不清楚。本课题通过了解人真皮来源微淋巴管内皮细胞的特性以及Ang2在体内外的作用来研究Ang2与皮肤淋巴管新生的相互关系。 方法：人真皮来源微淋巴管内皮细胞(HDLECs)通过酶消化结合CD34免疫磁珠阴性分选和CD31免疫磁珠阳性分选获得并进行鉴定，检测HDLECs和人皮肤组织表达Ang2的特点。HDLECs在体外进行单独培养以及与人皮肤成纤维细胞共培养，研究这两种培养条件下Ang2，血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)和其他细胞因子对HDLECs增殖和迁移的影响。将人Ang2和VEGF-C基因克隆入pCDNA3.1真核表达质粒载体并进行体外表达鉴定，制作小鼠尾部慢性阻塞性淋巴水肿模型。通过质粒注射的方法使Ang2和VEGF-C基因在淋巴水肿的鼠尾皮肤组织中过表达，观察两者对淋巴管再生的影响以及对淋巴水肿的治疗作用。 结果：胶原酶消化法结合免疫磁珠分选可以分离纯化人真皮来＼源微淋巴管内皮细胞并进行体外培养。HDLECs表达Ang2但不表达VEGF-C，而人皮肤成纤维细胞表达VEGF-C但不表达Ang2，这种特点可能与淋巴管新生的调节有关。Ang2在体外对HDLECs没有直接的促增殖和迁移作用。但是，当与人皮肤成纤维细胞共培养时，Ang2能够促进HDLECs的增殖和迁移，提示Ang2间接调节淋巴管的新生。转VEGF-C基因在体内能够促进淋巴管的再生并对慢性阻塞性淋巴水肿有治疗作用。转Ang2基因在体内不能够促进淋巴管的再生，对慢性阻塞性淋巴水肿没有缓解作用，可能与Ang2体内、体外不同的作用机制有关。 结论：淋巴管新生过程受VEGF-C和Ang2的双重调节。Ang2通过皮肤成纤维细胞间接调节淋巴管的新生。

目录

文摘

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英文缩略词表

绪论

第一章人皮肤微淋巴管内皮细胞的分离培养和鉴定

第二章Angiopoietin2在人皮肤组织和微淋巴管内皮细胞的表达

第三章Angiopoietin2对人淋巴管内皮细胞生物学行为的影响

第四章Ang2与VEGF-C基因的克隆和体外表达

第五章Angiopoietin2治疗阻塞性淋巴水肿的实验研究

全文总结

参考文献

附录就读期间发表的文章（第一作者）

致谢