固有荧光技术在胃癌诊断中的基础与临床研究

摘要

目的：通过体内和体外的研究，评价IFS-I固有荧光技术体内诊断胃癌的价值，并进一步探索胃粘膜和胃液中特征性荧光光谱的形成原因。 方法：1.分析IFS-I固有荧光诊断仪对胃部病灶产生的固有荧光光谱，根据不同光谱诊断标准求出诊断敏感度、特异度和准确率。2.采用特异度最高的诊断标准，检测胃镜初查怀疑胃癌的病例。3.利用IFS-I固有荧光诊断仪采集到的荧光光谱，比较胃癌组织不同的分化程度对固有荧光光谱特征的影响。4.利用IFS-I固有荧光诊断仪采集到的荧光光谱，比较胃癌组织不同的浸润程度对固有荧光光谱特征的影响。5.激光共聚焦显微镜观察高、中、低分化的三种胃癌细胞株和正常人胃上皮细胞株的固有荧光的分布，分析线粒体氧化呼吸链阻断剂对细胞内固有荧光强度的影响。6.激光共聚焦显微镜观察胃癌和非胃癌冰冻组织切片中固有荧光在各层的表现，比较绿色荧光和红色荧光浓度比值在不同病理组织的差异。7.建立高效液相色谱(荧光一紫外联用)系统测定胃液中的色氨酸浓度。8.比较胃液中色氨酸浓度在良恶性病变中的差异。9.测定不同时段胃癌细胞株和正常人胃上皮细胞株细胞培养液内色氨酸浓度的变化，比较良恶性胃粘膜细胞株对色氨酸消耗的差异。 结果：1.在400nm±20nm、670nm±20nm，460hm±20nm三个位置任意一处出现固有荧光光谱特征即诊断为胃癌的方法胃癌诊断敏感性最高可用于胃癌的普查。在460nm±20hm的荧光特征即诊断为胃癌的标准的特异度最高可用于疑似胃癌者的精查。2.460nm±20nm的标准对疑似胃癌患者的诊断具有较高的准确性。3.波长450nm-550nm间胃癌的分化程度与荧光强度比值呈正相关，在450nm-500nm处不同分化的胃癌组织荧光强度与良性病灶比较都有显著降低，可用于诊断。4.根据在400nm-550nm的胃粘膜荧光特征可诊断不同浸润深度的胃癌组织中。5.细胞内的绿色固有荧光主要来源于线粒体氧化呼吸链，胃癌细胞内绿色固有荧光显著低于正常细胞。6.与正常组织比较，胃癌组织粘膜层内绿色荧光减弱与红色荧光比显著降低，其中绿色荧光显著降低可用于区分良恶性病灶。7.胃癌患者胃液中色氨酸浓度显著高于在良性病灶。8.体外培养的胃癌细胞对色氨酸利用度低于正常细胞。 结论：本研究首次采用具有我国自主知识产权的337nm激光诱发固有荧光的诊断仪对胃部疾病进行诊断，该短波长激光能更完整的显示400nm-700nm的荧光光谱。通过荧光光谱分析，我们认为该技术是对白光胃镜的有益补充，适于胃癌普查和排查。对不同分化程度不同浸润度的胃癌，该仪器都能显示恶性病灶的荧光特征。本研究首次证实了胃癌细胞和正常胃上皮细胞内绿色固有荧光的差异可能来源于细胞线粒体氧化呼吸链辅酶。本研究观察到正常胃粘膜、低级别上皮内瘤变和胃癌粘膜荧光特征的改变。本研究还首次证实了胃液内的荧光物质色氨酸浓度在胃癌患者中有增高，并通过细胞学研究发现胃癌细胞对色氨酸消耗低于胃正常上皮细胞。色氨酸可能是与胃上皮细胞生长代谢相关的重要荧光标志物。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表索引

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引言

第一部分激光诱发固有荧光技术在胃癌诊断中的临床应用

第一章激光诱发固有荧光癌症诊断仪对胃部病变的诊断价值

材料和方法

结果

讨论

第二章激光诱发固有荧光光谱测定在胃癌疑似病例中的应用

材料和方法

结果

讨论

第三章激光诱发固有荧光光谱在不同分化类型胃癌的特征

材料和方法

结果

讨论

第四章激光诱发固有荧光光谱在不同浸润程度的早期胃癌中的表现

材料和方法

结果

讨论

第二部分离体胃癌细胞与组织固有荧光特征的研究

第一章人胃癌与癌前病变离体组织固有荧光研究

材料和方法

结果

讨论

第二章人胃癌细胞与人胃正常上皮细胞固有荧光分析

材料和方法

结果

讨论

第三部分胃液的固有荧光物质研究

第一章 胃液中色氨酸浓度测定方法的建立

材料和方法

结果

讨论

第二章胃癌和非胃癌病变患者胃液的色氨酸浓度比较

材料和方法

结果

讨论

第三章胃癌和正常胃上皮细胞株培养液的色氨酸浓度比较

材料和方法

结果

讨论

总结与创新点

参考文献

致谢

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