激活态雪旺细胞与几丁糖-胶原膜修复周围神经缺损的实验研究

摘要

周围神经缺损的修复仍是外科领域的一大难题，临床上主要采用自体神经移植的方法修复，但有明显的缺陷。组织工程为修复周围神经缺损提供了新的方法，本研究的目的就是利用激活态雪旺细胞和生物可吸收材料几丁糖一胶原膜构建人工神经，探索一种修复周围神经缺损的有效方法。本研究共分五部分： 第一部分 改良植块法培养成年大鼠雪旺细胞 目的：通过改良植块培养，探索快速获得高纯度成年大鼠雪旺细胞的培养方法。 方法：成年SD大鼠20只，分二组，每组10只大鼠，A组改良植块法，B组传统植块法。取大鼠坐骨双侧坐骨神经剥除外膜后，剪成0．5mm3。小块。A组：植块用0.03％胶原酶消化20分钟后培养；B组：植块直接培养。植块隔5天反复培养，传代纯化，共3次。通过细胞计数比较每次植块所得细胞量，雪旺细胞S-100染色测定纯度。 结果：改良植块法在细胞数量和纯度上均高于传统植块法，改良植块法第一次植块培养所得主要为成纤维细胞，起到分离成纤维细胞的目的，第二次雪旺细胞纯度较高85％，经纯化后可以达到95％，第三次植块雪旺细胞纯度95％。经3次反复植块就可以完全利用神经植块。 结论：改良植块法可以快速获得高纯度的雪旺细胞，方法简单，廉价。 第二部分 激活态雪旺细胞培养及其增殖规律研究 目的： 1．利用预变性神经和激活液培养激活态雪旺细胞。 2．比较激活态雪旺细胞和正常雪旺细胞的增殖能力。 方法：sD大鼠l0只，200g～250g。右侧坐骨神经切断一周后取材，剥除神经外膜，称重，用O.03％胶原酶加激活液(0．1m1/m1消化液)，按照改良植块法培养激活态雪旺细胞。左侧坐骨神经取材剥除外膜后称重，称重，用0.03％胶原酶消化，按照改良植块法培养正常雪旺细胞。比较单位神经所得的细胞量。取1×105的第二代细胞分别接种35个培养皿，通过各时间点(2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d)计数，绘制生长曲线，计算倍增时间，比较激活态雪旺细胞和正常雪旺细胞增殖能力。培养第8天细胞计数后提取蛋白，westernblot法比较两者CDKl的含量。取接种前及培养第14天的雪旺细胞作S-100染色。 结果：改良植块第二次培养7天后，每毫克预变性神经可得到7．5×10。个激活态雪旺细胞正常神经为1．5×104个正常雪旺细胞。传代培养后，激活态雪旺细胞在培养2天后计数均高于正常雪旺细胞，具有统计学差异(p

目录

前言

第一部分 改良植块法培养成年大鼠雪旺细胞

第二部分 激活态雪旺细胞培养及其增殖规律研究

第三部分 激活态雪旺细胞GAP43、BDNF、C-JUN、P21表达研究

第四部分 激活态雪旺细胞在几丁糖-胶原膜上生长规律的研究

第五部分 激活态雪旺细胞和几丁糖-胶原膜修复周围神经缺损的实验研究

全文小结

综述周围神经组织工程研究

博士在读期间论文发表情况

致谢