阿维菌素在鲈鱼组织中的富集消除规律研究

摘要

阿维菌素类药物(Avermectins，AVMs)是由链霉菌产生的一组大环内酯类物质，常用的有阿维菌素(Avermectin，AVM)和伊维菌素(Ivermectin，IVM)，因其具有作用机制独特、安全性高等特点，作为抗寄生虫药剂和杀虫杀螨剂被广泛应用在农业中。AVM作为农药，会随雨水流入水体；作为兽药，大部分以原型从粪便中排出，进而污染水体；近几年来由于养殖密度增大、环境恶化等原因，水生生物体内的寄生虫发病频率也随之增多，AVMs还作为鱼类抗寄生虫药剂，在国内外水产养殖中用来控制鱼虱病等寄生虫疾病，应用越来越广泛。然而，AVMs在水产养殖中的应用及其水体污染也导致其在水体和水生生物中富集的风险增加，不仅对消费者的健康构成潜在威胁，而且对我国水产品的国际贸易也造成不利影响。而目前国内外对水产品中AVMs多残留检测方法及AVMs在水生生物体内的药代动力学研究较少，因此有必要建立水生生物如鲈鱼组织和海水中AVMs的测定方法，并对其在鲈鱼体内的富集消除规律进行研究。 本论文首先建立了适合鲈鱼肌肉、鳃、肝脏、血液组织和海水中的AVM和IVM的高效液相色谱荧光检测法。鲈鱼各组织样品首先利用乙腈提取，正己烷脱脂，无水硫酸钠脱水，并经碱性氧化铝柱净化(肝脏经碱性氧化铝柱和C18柱净化)，蒸干，最后用N-甲基咪唑和三氟乙酸酐进行衍生化，滤膜过滤后上机分析。而海水样品则用与水不溶的乙酸乙酯提取，经无水硫酸钠脱水，蒸干，以N-甲基咪唑和三氟乙酸酐进行衍生化后上机分析。色谱柱采用Eclipse XDB-C18反相色谱柱，荧光检测器激发波长365nm，发射波长475nm。本方法鲈鱼肌肉、鳃组织中AVM的检测限为0.5μg/kg，IVM的检测限为1μg/kg；血液、肝脏组织中AVM的检测限为1μg/kg，IVM的检测限为2μg/kg。鲈鱼各组织平均回收率AVM均在80.1％～90.0％之间，IVM则在73.9％～85.5％之间。海水中AVM和IVM的检测限分别为0.025μg/L、0.05μg/L。在0.2μg/L、1μg/L和4μg/L添加浓度水平，AVM和IVM的平均回收率分别为95.1％～96.5％和88.7％～93.9％。 其次，以AVM作为AVMs的代表物，采用半静态法研究了AVM对鲈鱼的急性毒性。实验结果表明，鲈鱼对AVM较为敏感，其96h半致死浓度LC50为5.2324 μg/L，95％可信区间为4.8260μg/L～5.6388μg/L，安全浓度SC为0.523μg/L。AVM对鲈鱼的安全浓度范围较窄，确定给药剂量时必须严格加以控制。因此本论文以0.5μg/L的药物添加浓度作为鲈鱼药浴AVM的给药剂量。 最后，采用药浴的方式研究了AVM在鲈鱼肌肉、肝脏、鳃和血液组织中的富集和消除规律。药浴浓度为0.5μg/L，富集实验持续20天，随后进行消除实验，持续40天。通过对药代动力学参数分析可知，AVM均能在鲈鱼的肌肉、肝脏、鳃和血液组织中富集，但不同组织对AVM的富集能力不同，AVM在肝脏中的蓄积能力比较强，而在肌肉中的蓄积能力比较弱。肝脏中AVM最高浓度Cmax可达87.36±0.88μg/kg，药时曲线下面积AUC肝脏为12977.73±122.49μg·h/L而肌肉Cmax仅为7.74±0.08μg/kg，AUC肌肉仅为2105.75±27.76μg·h/L，肌肉、鳃、肝脏、血液对AVM的消除半衰期分别为6.9天、9.5天、8.2天和10.7天。由于影响水生生物药代动力学的因素较多，同种药物在不同水生生物体内的药代动力学参数有很大差异。因此，建议在15～18℃给药条件下连续药浴20天，休药期为40天。

目录

文摘

英文文摘

声明

0前言

0.1阿维菌素类药物简介

0.1.1族内药物简介

0.1.2理化性质

0.1.3应用

0.1.4国内外使用阿维菌素类药物的法律法规与技术标准

0.2阿维菌素类药物的作用机理、毒性与耐药性

0.2.1作用机理

0.2.2毒性

0.2.3耐药性

0.3阿维菌素类药物检测方法研究现状

0.3.1高效液相色谱—紫外检测法(HPLC-UV)

0.3.2高效液相色谱—荧光检测法(HPLC-FLD)

0.3.3液—质联用分析法(LC-MS)

0.3.4免疫测定法

0.3.5免疫色谱法

0.4阿维菌素类药物的药代动力学

0.4.1药代动力学简介

0.4.2阿维菌素类药物的药代动力学研究

0.5研究目的和意义

0.6研究内容和技术路线

0.6.1研究内容

0.6.2技术路线

1阿维菌素和伊维菌素在鲈鱼体内的残留检测方法研究

1.1材料与方法

1.1.1仪器和设备

1.1.2材料和试剂

1.1.3色谱条件

1.1.4方法建立

1.1.5标准溶液的配制及标准曲线的绘制

1.1.6回收率及相对标准偏差的测定

1.2结果

1.2.1衍生化时间的确立

1.2.2检测限和标准曲线

1.2.3回收率和精密度

1.2.4样品净化及色谱图

1.3讨论

1.3.1样品前处理

1.3.2衍生化

1.3.3色谱条件

1.4小结

2阿维菌素和伊维菌素在海水中含量的测定

2.1材料与方法

2.1.1仪器和设备

2.1.2试剂和材料

2.1.3色谱条件

2.1.4样品前处理

2.1.5标准溶液的配制及标准曲线的绘制

2.1.6回收率及相对标准偏差的测定

2.2结果

2.2.1流动相

2.2.2检测限和标准曲线

2.2.3回收率和精密度

2.3讨论

2.3.1衍生化

2.3.2提取溶剂的选择

2.3.3流动相的选择

2.4小结

3阿维菌素在鲈鱼体内的急性毒性实验

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2实验方法

3.1.3数据处理

3.2结果

3.2.1中毒症状

3.2.2阿维菌素对鲈鱼幼鱼的急性毒性

3.3讨论

3.4小结

4阿维菌素在鲈鱼组织中的富集、消除规律

4.1材料与方法

4.1.1实验材料

4.1.2实验方法

4.1.3数据处理

4.2结果

4.2.1水中阿维菌素浓度变化曲线

4.2.2药动学分析

4.3讨论

4.3.1鲈鱼对阿维菌素的富集和消除作用

4.3.2肝脏中的双峰现象

4.3.3药动学参数

4.3.4临床休药期的确定

4.4小结

5结论

参考文献

附录

致谢