大豆磷脂对大黄鱼(Larmichthys crocea)稚鱼和幼鱼生长和磷脂代谢的影响

摘要

以大黄鱼(Larmichthys crocea)为研究对象,通过摄食生长实验,比较研究大豆磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼生长的影响,并在此基础上探讨大黄鱼磷脂代谢的机理。本文研究内容和主要研究结果如下:
　　1.饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼生长和体组成的影响
　　分别以初始体重为(3.86±0.24)mg和(7.36±0.33)g的大黄鱼仔稚鱼和幼鱼为对象,进行30d和60d的摄食生长实验,研究饲料磷脂对大黄鱼的生长和体成分的影响,进而确定大黄鱼幼鱼饲料磷脂的最适需求量。仔稚鱼饲料中添加0％、5%和12%的大豆磷脂配制等氮等脂的人工微颗粒饲料,分别投喂15日龄大黄鱼仔稚鱼,并以投喂生物饵料组为对照。幼鱼饲料中添加0%、2%、4%、6%和8%的大豆磷脂配制等氮等脂的实验饲料。实验结果表明,随着饲料磷脂含量的升高,大黄鱼仔稚鱼的存活率、特定生长率和终末体长呈现升高的趋势。饲料不添加磷脂组的存活率、特定生长率和终末体长显著低于对照组和磷脂添加组(P<0.05),饲料磷脂添加组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。然而,饲料中添加磷脂并未显著影响幼鱼的存活率和特定生长率(P>0.05)。随饲料磷脂含量的升高,稚鱼鱼体粗脂肪呈现升高的趋势。饲料不添加磷脂组的鱼体粗脂肪显著低于对照组和磷脂添加组(P<0.05),饲料磷脂添加组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,幼鱼鱼体粗脂肪含量呈现先下降后升高的趋势,当饲料磷脂含量为5.86%时最低,显著低于其它处理组(P<0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,幼鱼肝脏脂肪含量呈现先升高后下降的趋势。当饲料磷脂含量为3.05%时最高,显著高于其它处理组(P<0.05);饲料不添加磷脂组显著高于7.4%和9.63%添加量组(P<0.05)。综上结果,饲料磷脂对生长的促进作用主要在稚鱼阶段;幼鱼阶段饲料磷脂不会显著影响大黄鱼的生长,但是适宜的磷脂添加量可能有利于脂肪的吸收转运。
　　2.大黄鱼磷脂代谢关键基因的克隆及其表达量随稚鱼生长发育的变化
　　利用同源克隆技术和RACE技术从大黄鱼肝脏中成功扩增出5’胞苷三磷酸磷脂酰胆碱胞苷转移酶(CCT)和胞质型磷脂酶A2(cPLA2)的全长。序列分析发现,CCT全长2419bp(Genebank登录号:KF006239.1),包括273bp的5’端非编码区,1107bp的开放阅读框,1010bp的3’端非编码区,共编码369个氨基酸。cPLA2全长共计2550bp(Genebank登录号:KF006240.1),其中5’端非编码区176bp,开放阅读框2169bp,3’端非编码区205bp,共编码723个氨基酸。系统进化树分析表明,大黄鱼的CCT和cPLA2基因与其他鱼类的亲缘关系较近,与其他物种的亲缘关系较远。应用Real-time PCR对不同日龄的大黄鱼稚鱼CCT和cPLA2mRNA的表达量进行检测。定量结果表明,孵化后,大黄鱼稚鱼CCT和cPLA2的表达量随日龄的变化先显著升高后显著下降并趋于平稳,且都在15日龄时达到最大值。CCT和cPLA2表达量的变化与大黄鱼稚鱼消化系统的发育同步。
　　3.饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼磷脂酰胆碱合成代谢的影响
　　研究结果表明,在稚鱼阶段,饲料磷脂没有显著影响稚鱼鱼体磷脂酰胆碱胞苷酰基转移酶(CCT)、1,2-二脂酰甘油:胆碱磷酸酰基转移酶(CPT)、二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)、磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶(PEMT)和胞质型磷脂酶A2(cPLA2)mRNA的表达(P>0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,分泌型磷脂酶A2(sPLA2)mRNA的表达量呈现下降趋势。当饲料中不添加磷脂时,分泌型磷脂酶A2(sPLA2)mRNA的表达量最高,显著高于对照组和磷脂添加组(P<0.05)。对照组LPCAT mRNA的表达量最高,显著高于饲料处理组(P<0.05),各饲料处理组织间差异不显著(P>0.05)。随着磷脂含量的升高,微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)mRNA的表达量呈现下降的趋势。当饲料中不添加磷脂时最高,显著高于对照组和磷脂添加组(P<0.05)。而各组之间载脂蛋白B100(apoB100)mRNA的表达量没有显著性差异(P>0.05)。幼鱼阶段,饲料磷脂没有显著影响幼鱼肝脏CCT、CPT、DGAT、PEMT、sPLA2、cPLA2和LPCAT mRNA的表达量(P>0.05)。综上所述,磷脂酰胆碱(PC)合成代谢关键酶的调控可能发生在蛋白水平或磷酸化水平,而不是转录水平。重塑后的PC可能影响脂蛋白的代谢。

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引言

第一章 文献综述

1 磷脂代谢

2 磷脂合成代谢关键酶的研究进展

3 磷脂分解代谢关键酶研究进展

4、展望

第二章 饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼生长和体组成的影响

1 引言

2 材料方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第三章 大黄鱼磷脂代谢关键基因的克隆及其表达量随稚鱼生长发育的变化

1 引言

2 材料方法

3 结果

4 讨论

第四章 饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼磷脂合成代谢和V LD L分泌的影响

1 引言

2 材料方法

3 实验结果

4 讨论

5 结论

第五章 全文总结

参考文献

致谢

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