2型糖尿病肾病尿液蛋白组学研究及早期诊断标志物的筛选

摘要

糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）是2型糖尿病患者（Type2diabetes mellitus，T2DM）最常见、最严重的慢性并发症，发病率逐年升高，已成为危害人类健康的重大疾病。在欧美国家DN也是终未期肾病（End-stage renal disease，ESRD）的最常见病因，约占全部ESRD病例的44％。早期诊断DN并延缓其发展越来越受到人们的重视，但DN起病隐袭，目前临床上早期诊断DN存在较大困难。肾穿刺活检术创伤大，并发症多，而且费用较高，患者难以接受，不能作为T2DM患者检查的常规项目，而尿液富含肾脏病变信息，取材简单、无创伤，可重复取样，所以在DN早期诊断方面，对尿液的分析一直备受关注。目前临床上普遍采用尿微量白蛋白（Microalbuminuria，MALB）作为DN早期诊断指标，但已有许多研究发现MALB诊断DN的准确性和特异性不高，它受多种因素的影响，比如泌尿系统的炎症、出血，都会有血浆白蛋白的渗出或漏出，使尿白蛋白排出量增加，且在MALB出现时，DN已发展到第Ⅲ期，因而只依靠监测MALB并不能及时准确地对DN做出诊断，会带来较高的误诊和漏诊。随着蛋白质组学技术的发展，将其与体液技术相结合的尿液蛋白质组学技术为DN早期诊断标志物的筛选提供了技术支持，利用尿液蛋白质组学技术可能发现一些新的DN早期诊断标志物。本研究通过普通双向凝胶电泳（Two dimensional gel electrophoresis，2-DE）和荧光差异双向凝胶电泳（Two dimensional fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DIGE）技术对T2DM合并微量蛋白尿、大量蛋白尿、正常蛋白尿的患者，以及健康志愿者的尿液标本进行比较蛋白组学分析，筛选DN患者尿液中的差异表达蛋白，对差异蛋白进行质谱鉴定和生物信息学分析，并挑选出两种感兴趣的差异蛋白进行深入研究，评价其与2型糖尿病肾病的关系以及早期诊断糖尿病肾病的价值，本课题研究内容共分为以下五部分。 第一部分2型糖尿病肾病患者尿液2-DE图谱的建立及差异蛋白的筛选 目的:建立T2DM合并正常蛋白尿组（无肾病期）、微量蛋白尿组（DN早期）、大量蛋白尿组（DN临床期）以及正常对照组的尿液双向凝胶电泳（2-DE）图谱及相关技术，并分析比较四组尿液2-DE图谱的差异，筛选出在2型糖尿病肾病患者差异表达的蛋白点。 方法:收集8例T2DM合并大量蛋白尿患者（UAER>300mg/24h，DN2组），8例T2DM合并微量蛋白尿患者（30

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文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

引言

第一部分2型糖尿病肾病患者尿液2-DE图谱的建立及差异蛋白的筛选

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

附图与附表

第二部分2型糖尿病肾病患者尿液2D-DIGE图谱的建立及差异蛋白的筛选

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

附图与附表

第三部分差异蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

附图与附表

第四部分差异蛋白E-cadherin与2型糖尿病肾病的相关性研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

附图与附表

第五部分差异蛋白orosomucoid与2型糖尿病肾病的相关性研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

附图与附表

全文小结

参考文献

致 谢

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