无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定

摘要

目的：探讨利用无血清培养基从原发胶质母细胞瘤组织中分离培养胶质瘤干细胞的可行性；观察并比较胶质瘤干细胞异种动物体内成瘤能力。 方法：无菌条件下取肿瘤深部无坏死囊变、未电凝组织，剪切消化成单细胞悬液后，加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂的无血清DMEM/F12培养基，体外分离培养获得胶质瘤干细胞。待培养孔中细胞团数量增多、培养液刚刚变色时，吸取含有细胞团的培养液进行传代。取第3代胶质瘤干细胞，加入巢蛋白和CD133抗体行免疫荧光检测；加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导5d，行胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色观察分化情况。将不同浓度胶质瘤干细胞与胶质瘤细胞接种于4w龄Balb/c裸鼠腋下，观察肿瘤形成情况，接种6w后，将裸鼠体内形成的肿瘤取下，经过固定、脱水、浸蜡、包埋后行HE染色。 结果： 1、原代培养7～10d可形成大小不一的细胞团，球形或近似球形，呈悬浮或半悬浮状态生长，细胞形态均一，折光性好；传代24h后次代细胞团形成，细胞的大小、形态与原代无明显差别，连续传代5次后细胞团增殖活跃。 2、第3代胶质瘤干细胞呈巢蛋白和CD133阳性表达， 3、加入胎牛血清后细胞球贴壁分化，呈胶质纤维酸性蛋白阳性。 4、胶质瘤干细胞接种于裸鼠体内可形成胶质瘤组织，移植瘤经HE染色证明为胶质瘤组织。 结论： 人脑胶质瘤组织中存在胶质瘤干细胞，在体外无血清条件下可保持未分化的悬浮状态；加入血清后贴壁分化呈胶质瘤细胞样或神经元样，符合干细胞的自我繁殖和多向分化特征；胶质瘤干细胞注射于裸鼠体内可以形成胶质瘤。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章肿瘤干细胞的培养

第二章肿瘤干细胞的鉴定

第三章异种动物成瘤试验

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述 脑肿瘤干细胞的研究进展

附图

攻读学位期间的研究成果

致谢