大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马区β-淀粉样蛋白和突触后致密物质-95的表达

摘要

脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍的主要危险因素。海马在人和动物学习，记忆整合中起重要作用，认知障碍与海马区神经元变性、坏死、缺失有密切关系。目前国内有报道说β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)参与了脑缺血再灌注海马神经元损伤的病理过程，还有相关国外报道表明动物和人类Aβ表达是神经元的急性反应，并引发瀑布样反应导致Aβ样病理改变。另外，突触后致密物质-95(postysynaptic densities-95，PSD-95)参与了脑缺血再灌注海马神经元损伤的病理过程，本研究采用线栓法建立MCAO模型，用免疫组化方法观察Aβ、PSD-95在大鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的表达，为临床防治提供理化基础。 材料与方法 全部实验动物48只，2-3月体重100～130克(由中国医科大学实验动物中心提供)，随机分为3组：①正常对照组(n=6)、②假手术组(n=6)、③缺血再灌注组(n=36)③组对应有(6h、1d、2d、3d、5d、7d)等时间点，每个时间点n=6。脑缺血再灌注模型的建立：参照I～onga报道的线栓法建立大鼠MCAOA闭塞/再灌注模型。缺血2小时后再灌注6h、1d、2d、3d、5d、7d。在不同时间点，大鼠在10％水合氯醛(0.3g/Kg)腹腔麻醉下左心室插管，在4％多聚甲醛灌流取脑，固定，浸蜡、包埋，连续切片，分别进行HE和A13、PSD-95免疫组化染色(SABC法、DAB显色)。光镜下半定量计数100μm长度内的海马CAl区结构完整的正常锥体细胞数，利用病理图文分析系统测量AB、PSD-95阳性染色相对吸光度值(A值)。所获得数据用x±s表示，组间比较采用方差分析。 结果 HE染色和Aβ、PSD-95免疫组化染色结果显示，缺血再灌注组3d时，海马Cal区神经元开始减少，Aβ阳性细胞数开始增加，5d达高峰，7d开始减少。假手术组大鼠海马区少有PSD-95的活化，再灌注6h组大鼠海马Cal区PSD-95阳性细胞增多并出现高峰，持续3d，再灌注5d后开始下降。 海马在人和动物学习、记忆整合中起重要作用，认知障碍与海马列区神经元变性、坏死、缺失有密切关系。相关研究发现，脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍的主要危险因素。海马区神经元凋亡的过程中有许多神经毒性物质参与。本实验通过研究Aβ、PSD-95在大鼠脑缺血再灌注损伤后海马,区神经元的表达，来探讨脑缺血再灌注海马神经元损伤的发病机制。 本研究发现了在大鼠MCAO缺血再灌注损伤后Aβ表达异常增强，Aβ具有神经毒性，其毒性可以通过直接作用于细胞，增强、放大各种伤害性刺激如低糖、自由基的损伤效应，破坏细胞内钙离子的稳态，使神经元发生死亡。国外文献报道，在动物和人类中Aβ表达是神经元对损作的急性反应，尽管这种损伤只是导致短暂的Aβ代谢破坏，但很可能由此引发瀑布样反应导致AD样病理改变。 本研究发现了在大鼠MCAO缺血再灌注损伤后PSD-95表达异常增强，这些结果表明PSD-95可能参与了早期缺血引起神经细胞死亡的变化，暗示某些药物可通过减弱PSD-95活化来改善缺血性损伤。PSD富含神经传递质受体、离子通道和信号分子等，认为PSD具有突触后神经元接受和传递突触信号的功能蛋白靶控的重要作用。PSD-95是PSD的一个主要蛋白，近期研究认为它直接参与了缺血信号的转导，说明了PSD-95调控作用对突触功能和神经元的存活有明显的作用。． 总之，Ap和PSD-95参与了大鼠脑缺血再灌注后海马神经元损伤的病理过程，推测Aβ神经毒性作用和PSD-95的活化作用可能是脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一，为脑缺血损伤机制增添了新的内容。1.Aβ在脑缺血再灌注海马Cal区表达增多，提示Ap在脑缺血损伤的病理改变中具有重要作用。2.PSD-95在脑缺血再灌注海马Cal区表达增多，提示PSD-95在脑缺血损伤早期病理改变中具有活化作用。

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实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 Aβ,PSD-95与脑缺血再灌注损伤

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